岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护

1.目的
规范岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
2.范围
本规程适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
3.职责
质检室仪器分析员负责岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4.规程
4.1 系统组成:本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵(分主/A泵和副/B泵)、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、SCL-10AVP系统控制器、CLASS-VP(Ver. 6.1)工作站和IBM台式电脑等组成。
4.2 准备
4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3 开机
4.3.1接通电源,依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器、系统控制器,待泵和检测器自检结束后,打开电脑显示器、主机。
4.3.2启动CLASS-VP工作站
4.3.2.1确认仪器、系统控制器启动后,打开计算机电源,并从Windows的任务栏中选择Start > Programs > Chromatography > CLASS-VP以打开CLASS-VP菜单窗口。(可以通过桌面上的快捷方式,迅速打开CLASS-VP主菜单)
4.3.2.2 在Main Menu 窗口中双击Instrument图标。
4.3.2.3 输入用户名和口令,以登录CLASS-VP。缺省情况下,已经用户名和口令分别为“system”和“2001”。
4.3.2.4 当SCL-10Avp发出蜂鸣声后,说明已建立与计算机之间的连接,Instrument窗口打开。
4.3.2.5 启动色谱图监视器
4.3.2.5.1 从Windows任务栏中选择Program> Chromatography > Chromatogram Monitor 以打开 Chromatogram Monitor 窗口。
4.3.2.5.2 根据需要设置受监视项的类型和格式。
4.3.2.6 启动脱机处理
4.3.2.6.1 在 Main Menu 窗口中双击 Offline Processing 图标。
4.3.2.6.2 双击为数据采集而设置的仪器名称,以打开仪器进行脱机处理。
4.4 CLASS-VP初始系统设置(设置方法缺省参数)
4.4.1 单击“New”按钮,并接着单击 New Method 即可初始化方法参数。
4.4.2 从Option 选项卡的Method菜单中选择命令,并在对话框中更改每条命令的参数,以选择常用的选项。
4.4.3 选择File > Method > Save as Default 即可将在此处设置的选项保存成缺省参数。
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4.5 设置分析参数
4.5.1 设置LC参数
4.5.1.1 设置新的分析参数时,请从通过单击“New”按钮打开的列表中选择New Method,则将加载缺省方法参数,且方法文件名“Untitled.met”将显示在LC Setup Assistant窗口中,通过单击Open按钮即可打开现有的方法文件。
4.5.1.2 通过在LC Setup Assistant窗口中单击泵和检测器的图标来配置LC参数。使用时钟图标输入时间程序命令。
4.5.1.3 选择 File > Method > Save as 并输入方法名称。
4.5.2 将方法下载到SCL-10Avp:完成创建方法之后,单击下面的图标即可将该方法下载到SCL-10Avp上。下载完成时,出现一个消息窗口,请单击OK。
4.5.3 启动仪器控制:激活SCL-10Avp,将液体流量调整到已下载的方法参数。当所有组分稳定时,出现“Ready”指示灯,且状态栏变为绿色。
4.5.4 设置方法(斜率):
4.5.4.1 请在检测器的基线稳定之后选择Control > Preview Run或单击工具栏上的“Preview”按钮。
4.5.4.2 单击数据图形之后,再在Integration工具栏上单击“SLOPE”按钮,即可从基线测量斜率的参考值。
4.5.4.3 单击SLOPE对话框中的Add to table按钮,即可在Method > Integration Events 表中记录此设置。
4.5.5 设置方法(自定义报告):单击工具栏上的“Report”按钮,打开Method Custom Report窗口;单击“Open”按钮,然后选择Open Report Temlate 打开一个模板文件。
4.5.6 保存已更改的方法:要当前名称保存方法文件,亦即覆盖原来的名称,请从菜单中选择File > Method > Save 命令,或单击“Save”按钮,然后单击下拉菜单上的Save Method。4.6 平衡系统
4.6.1系统的操作
4.6.1.1基线检查
4.6.1.2 单击LC Setup Assistant 窗口中 “Baseline Check”按钮。
4.6.1.3 指定测量噪音和漂移的起始时间和结束时间,对于Noise 的Threshold值,请输入期望的满刻度值的大约1/100;对于Drift的Threshold值,请输入1/10。单击Start开始测量。测量结束后,测得的噪音值和漂移值将出现在Status区域里。
4.6.1.4 采集数据之前要检查基线,如果基线检查检查合格,即可立即开始采集。如果Export on Fail 对话框已经选中,并且在指定的Maximum时间内重复进行基线检查仍然失败,则不会进行数据采集。
4.6.1.5 启动和关闭单击LC Setup Assistant 窗口中的Startup/Shut Down 按钮。
4.6.1.5.1设置启动条件
4.6.1.5.1.1 在Startup窗口中指定启动的Date and Time,当达到指定的日期和时间时即可下载指定的方法文件参数。
4.6.1.5.1.2 如果此处未指明方法文件,则使用最近使用的方法文件。如果需要,请在Offline Processing窗口中创建一个用于启动的方法文件,并在此处指定它。
4.6.1.5.2 设置关闭条件
4.6.1.5.2.1在Offline Processing 模式下创建一个用于关闭的方法。通常情况下需要将泵的流速设置到低(或为零),并且需要关闭检测器的灯管,等等。用一个新的文件名将此方法保存到磁盘上。
4.6.1.5.2.2 单击Shut Down窗口中“Open”按钮以选择关闭方法文件。另外,如果需要,也可选中或取消选中“Sample Cooler OFF”或“Degasser OFF After Cool Down”选项。
4.6.2 等度洗脱方式
4.6.2.1 按A泵的键,A、B泵将同时启动,pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积的流动相。
4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液,如漏液应予以排除。
4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡,按4.5.6操作。
4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min,噪声为<0.001mV时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。
4.6.3 梯度洗脱方式
4.6.3.1 以检验方法规定的梯度初始条件,按4.6.2项下方法平衡系统。
4.6.3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法:按A泵的键,prog.run指示灯亮,梯度程序运行;程序停止时,prog.run指示灯灭。
4.7 进样、采集运行
4.7.1 进样
4.7.1.1进样前按检测器键调零,按软件中 按钮校正基线零点,再按一下 按钮使其弹起。
4.7.1.2用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。
4.7.2采集运行
4.7.2.1从菜单栏中选择 Control > Show Tray。或者,单击LC Setup Assistant窗口中的“Single Run”按钮或工具栏上的Single Run按钮。指定所需的项并单击Start按钮。
4.7.2.2 记录自动启动和关闭:单击LC Setup Assistant窗口中的Start/Shut Down按钮。在Start/Shut Down对话框中单击需要记录的Startup、Shut Down和 Startup/Shut Down中的任一按钮并确认或更改设置。单击Submit按钮进入待机对话框,该对话框停留在屏幕上等候执行设置。
4.7.2.3终止采集
4.7.2.3.1 延长运行时间:选择Control > Extend Run并输入添加到运行结束的时间值。要缩短采集时间,请指定一个负值。(对当前采集有效)
4.7.2.3.2 紧急停机
4.7.2.3.2.1 采集过程中,单击工具栏上的“Stop Run”按钮。接着就会出现一条消息,询问您是否“Abort the current run”,如果单击Yes,当前的数据采集就会终止。
4.7.2.3.2.2 如果在随后出现的消息上单击Yes, 剩余的采集就不会再运行,序列就会终止。如果单击No, 剩余的采集就会开始运行。
4.8更换流动相并排气泡
4.8.1 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中;
4.8.2 逆时针转动A/B泵的排液阀180°,打开排液阀;
4.8.3 按A/B泵的键,pump指示灯亮,泵大约以9.9ml/min的流速冲洗,3min(可设定)后自动停止;
4.8.4 将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。
4.8.5 如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。
4.8.6 如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中,设流速为5ml/min,按键,冲洗3min后再按键停泵,重新接上柱并将流速重设为规定值。
4.9 清洗系统和关机
4.9.1 数据采集完毕后,关闭检测器,继续以工作流动相冲洗10min后,换水冲洗。
4.9.2 清洗进样阀
4.9.2.1 用启动注射器吸10ml超纯水;
4.9.2.2 将注射针导入口冲洗头(Rheodyne部件号7125-054)连接到注射器出口上(不要针),并将它们一起接到进样口上;
4.9.2.3 使进样阀保持在Inject位置,慢慢将水推入,水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈,由样品溢出管排出。
4.9.3 清洗柱
4.9.3.1 C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上,再用甲醇或乙腈冲洗20min。
4.9.3.2 Protein PAK60柱先用超纯水冲洗90min以上,再用甲醇或乙腈冲洗40min。
4.9.4 用水冲洗柱后,分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。
4.9.5 清洗完成后,先将流速降到0,再依次关闭泵、脱气机、UPS,断开电源。
4.9.6 填写使用记录。

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