孔雀石绿检测试剂盒使用指南

  适用

  本试剂盒适用于水产品中孔雀绿的定量检测。

  原理

  本试剂盒原理是竞争酶联免疫检测方法,利用萃取剂从样品中提取到孔雀石绿.在固相载体微孔板中加入标准和处理的样品,然后加入孔雀石绿抗体,反应30分钟后洗板,然后加入HRP标记的孔雀石绿孵育30分后洗板,洗涤后加入显色剂,结合的酶将无色的显色剂转化为蓝色的产物;加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色;在450nm波长进行检测,样品中的孔雀石绿浓度与吸收光强度成反比。

  特异性

  与孔雀石绿类似物的交叉反应

  检测限

  0.01ppb

  试剂盒组成

  96孔酶标板:1块(8×12条)。

  标准品贮备液(Standard):1瓶(0.4ml/瓶),100ppb。

  酶标记物:1瓶(25倍,0.8ml)HRP标记的孔雀石绿结合物

  孔雀石绿抗体:1瓶(9ml)

  底物显色液:1瓶(16ml)

  终止液:1瓶(12ml、1NHCl)。

  结合物稀释液:1瓶(15ml)。

  样本稀释缓冲液:2瓶(25ml)

  浓缩洗涤液:1瓶(5倍,100ml/瓶)、酶标板的洗涤。

  使用说明书

  操作步骤

  1.使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。装有洗液的洗瓶。

  2.从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条,放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。

  3.用移液器吸取75μl样品处理物到对应的测试孔,同时在每个孔中都加入75μl抗体溶液。

  4.轻轻震动30秒使其混匀孵育30分。

  5.孵育完成后,将微孔中的溶液倒入水槽中,用配好的洗板缓冲液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul,微震荡洗涤后倒掉,重复三次,总共四次洗板。拍板,去掉残留的洗液。

  6.每个孔加入150μL酶标结合物.

  7.轻轻震动30秒使其混匀孵育30分

  8.孵育完成后,将微孔中的溶液倒入水槽中,用配好的洗板缓冲液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul,微震荡洗涤后倒掉,重复三次,总共四次洗板。拍板,去掉残留的洗液。

  9.每个孔加入150μL底物.孵育30分

  10.每孔加入100μL终止液.

  11.450nm下读取每个孔的吸光度值(OD)

  结果分析

  1.半定量结果的判定,可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定,样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值,则说明样品的孔雀石绿含量大于此标准的浓度,样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值,则说明样品的孔雀石绿含量小于此标准的浓度。

  2.定量结果判定,需要以标准的吸光度值为X轴,标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图,将标准浓度吸光度值的点用直线连接,样品的吸光度值也位于这条直线上,根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度,如果样品的吸光度值大于最小标准的吸光度值或小于最大标准的吸光度值,即可说明此样品中孔雀石绿的含量小于0.01ppb或大于1ppb。

  3.当样品的浓度高于1ppb时要调节稀释倍数来获得最终的浓度。
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