高压灭菌器的灭菌原理和使用步骤，灭菌的方法基本上分为二大类：物理方法(干热灭菌、湿热灭菌、射线灭菌、滤过灭菌)和化学方法(气体灭菌、药液灭菌)。其灭菌原理如下：
湿热灭菌是物品放入密闭的加压灭菌锅内加热，产生蒸汽，排除冷空气后密闭，使蒸汽不溢出，增大压强，使水的沸点升高，高于100℃，导致菌体蛋白质凝固变性达到目的,湿热灭菌最主要的设备就是高压灭菌器。
常用高压灭菌器主要有手提式高压灭菌器、台式高压灭菌器、立式高压灭菌器等几种，种类不同，但使用基本相似，使用程序如下：
a)使用前应了解并掌握高压灭菌器的原理及操作规则，以及不正确使用导致灾难性后果，保障消毒灭菌的质量，使用人员需经过有关培训。
b)所有具有传染性的废物都应该高压灭菌。
c)开始灭菌前所有物品必须贴有灭菌指示带，废物灭菌后可以看到灭菌是否完全。
d)高压灭菌操作人员在使用高压灭菌器时不得离开岗位，高压灭菌器应按照规定进行安全和计量检定，检定合格方可投入使用，并应注意日常维护保养。
e)高压灭菌器内的物品不得放的过满，否则影响灭菌效果。放好被消毒灭菌的物质后，高压灭菌器的盖子或门尽量拧紧。
f)实验室高压灭菌器由三级生物安全防护实验室管理员定期检查，以确保高压灭菌器正常工作，防止意外事故发生，保证消毒灭菌效果。