采样检验箱使用方法
1、细菌中数检验方法
1.1试验准备：
1.1.1水样采集：采水容器事先灭菌或使用前用被检水反复冲洗数次，然后采水。1.1.2移液管吸嘴的消毒：取下套在酒精灯上的支架，把支架小口端安装在酒精灯口上，杯放在支架上，倒入适量水，把吸嘴放入杯内，煮沸5-10分钟，备用。
1.2.肉汤营养纸垫制备：
1.3.1将小皿用酒精棉球擦拭消毒，晾干后每皿加一片纸垫。
1.2.2取肉汤安瓶一支倒人小杯内，加入15mi蒸馏水或自来水煮沸溶解即为营养肉汤。必要时。可以直接用开水冲泡溶解。
1.2.3取盛有纸垫小皿，每皿纸垫加营养肉汤1.8-2.5ml(液体充盈程度以不淹没滤膜为宜)，即为肉汤营养垫，备用。
1.3检验水样：
1.3.1细菌过滤器系统的组装;从检验箱中取出过滤器，将滤床板端插入检验箱前侧箱壁与塑料板之间的夹缝内，把三通管带细塑料管一端插入滤器下面的孔内，三通管大孔端插入20ml注射器头下，接头处要严密。备用。
1.3.2细菌过滤器的处理：用燃着的酒精棉球擦拭细菌过滤器的滤床和漏斗，待凉后，取一片滤膜，放在滤床上，装上漏斗并拧紧。
1.3.3过滤水样：生活饮用水为1ml，平分两份，水源水可同时做原水1ml和稀释50倍(箱内50ml小瓶放入1ml被检水源水，家50ml冷开水或无菌水)1ml两个稀释度，水样加到滤器中后使之全部覆盖膜面，然后抽滤至水干，将阻菌滤膜面朝上贴于肉汤营养垫上。注意膜与营养垫之间不要有气泡。
1.4培养：37℃培养箱中培养24小时。
1.5菌落计数：计数膜上所有菌落数。
细菌总数计数方法：
细菌总数(个/ml)=膜上的平均菌落数*稀释倍数
1.6注意事项：
1.6.1检验细菌总数过程中应尽量做到无菌操作。
1.6.2每检验完一个水样应用燃着的酒精棉球烧灼漏斗和滤床后，再进行检验第二个样品。
1.6.3每次试验完毕，必须用干纱布把过滤漏斗和滤床等处擦干，以免腐蚀漏斗。
2、大肠菌群检验方法：
2.1试验准备：同细菌总数检验方法(1.1)
2.2远藤营养垫的制备：
2.2.1将小皿用酒精棉球擦拭消毒、晾干。每皿内加一片纸垫。
2.2.2取远藤培养基安瓶一支，倒人小杯内，从酒精棉球瓶内取出棉球挤压1-2滴酒精于培养基上使其刚好湿透，用玻棒搅匀，然后加15ml冷开水或蒸馏水，摇匀溶解即为远藤营养垫。
2.2.3取盛有纸垫培养皿，每皿纸垫加远藤培养液1.8-2.5ml(液体充盈程度以不淹没滤膜为宜)，即为远藤营养垫。
2.3检验水样：
2.3.1细菌过滤器系统的组装：同细菌总数(1.3.1)
2.3.2细菌过滤器系统的处理：同细菌总数(1.3.2)
2.3.3过滤水样：生活饮用水，应检100-330ml，将被检水样倒入漏斗内至上刻度线处(100ml)，检验330ml水量时，可过滤100ml后，再加100ml，直至滤完330ml，(如遇不易过滤水，可分2-3张膜过滤，分别贴于2-3个远藤应营养纸垫上，结果将膜上菌落数相加计算)，将膜取下，小心贴于备用的远藤营养纸垫上。此时应注意勿使滤膜与营养垫之间留有气泡;检验未处理的水源水，取1ml水眼个，方法：同细菌总数，不同处仅把阻菌膜贴于远藤营养垫上。
2.4培养：37℃培养箱中，培养18-24小时。
2.5菌落计算：计数膜上带有金属光泽或深黑色菌落。即为大肠菌数。
大肠菌群数计算方法：
大肠菌群数(个/升)=膜上菌落数*稀释倍数*1000
被检水样体积(ml)
2.6注意事项：同一水样，同时检验细菌总数和大肠菌群时，可不处理滤器;其它项同细菌总数(1.6)
3\水中肠道致病菌(沙门氏菌属和志贺氏菌属)检验方法：
3.1快速检验法：
3.1.1增菌培养：
3.1.1.1直接增菌法：吸取待检水样10ml放入增菌瓶中，加入一小管(0.44g)沙门氏菌—志贺氏菌通用增菌培养基，充分振摇搅拌使其溶解。然后置37℃培养箱培养24小时。
3.1.1.2浓缩增菌法：吸取待检水样100ml(更大或更小体积的水样，视水质而定)通过滤膜过滤，然后将阻菌滤膜取下，放入含有一小管(0.44g)沙门氏—志贺氏菌通用增菌培养基的10ml增菌液中(可用被检水或无菌蒸馏水配制增菌液)置37℃培养箱，培养24小时。
3.1.2协同凝集试验：具体步骤见“协同凝集试验方法”。不同种类的抗原液(即不同种类的沙门氏菌、志贺氏菌增菌后的菌悬液)分别用对应的凝集试剂进行协同凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。
3.1.3协同凝集试验方法：
3.1.3.1取0.5ml生理盐水将协同凝集试剂溶解，用手摇匀。
3.1.3.2取1滴凝集试剂于载玻片上，加一滴抗原液(经增菌液培养24小时的水样)，充份混匀，1-3分钟内观察结果。
3.1.3.3结果判断标准：
悬液完全透明，出现大量凝块和颗粒为++++
透明度稍差，出现大量凝块和颗粒为+++
悬液半透明，凝块和颗粒较少为++
悬液不透明，有少量颗粒为+
悬液浑浊，无颗粒出现为—
++以上为阳性，+为可疑。
对照：标准抗原作阳性对照
生理盐水作阴性对照
3.1.3.4注意：协同凝集试剂应置低温冷冻保存，有效期3年。
3.2常规检验方法：
3.2.1增菌培养：快速检验法中的直接增菌法和浓缩增菌法相同，其中志贺氏菌的增菌时间可以为16-18小时。
3.2.2平板分离：取上述经增菌的沙门氏菌、志贺氏菌培养液，用接种环化线接种改良SS选择琼脂平板，置37℃培养箱中培养24小时。(如使用其它选择培养基时，请注意对宋内氏痢疾杆菌是否良好，还是不生长或生长很差)。
3.2..3挑选菌落接种双糖管：每个平板挑取5个以上可疑肠道病原菌菌落，接种于双糖铁或三糖铁试管培养基中(将克氏双糖铁干燥培养基加水煮沸溶解后分装于塑帽试管中，3ml，高压蒸汽灭菌或水浴100℃15分钟后放成高层斜面，凝固后即成)。置37℃培养箱中培养18-24小时。
附：沙门氏菌属和志贺菌属在改良SS选择琼脂平板上的菌落特征：
沙门氏菌属，菌落呈无色透明或半透明或中间有黑心，直径为1-3毫米(培养时间长时，有的菌落中心略呈微粉色，但与红色的大肠菌菌落完全不同)。
志贺氏菌属，菌落呈无色透明或半透明(宋氏痢疾杆菌的菌落中心有时略呈浅色)，直径1-3毫米。
3.2..4生化反应及血清学检验：
沙门氏菌属：在双糖铁或三糖铁培养基上，底层变黄(分解葡萄糖产酸)，产气或不产气(如伤寒沙门氏菌不产气)，一般产H2S;斜面呈红色(不分解乳糖)。用沙门氏菌多价血清或单价抗血清进行凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。
志贺氏菌属：在双糖铁或三糖铁培养基上，底层变黄(分解葡萄糖产酸)，不产气，无动力，不产H2S;斜面呈红色(不分解乳糖)。用志贺氏菌多价血清或单价血清进行凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。