即使一台性能良好的分光光度计，在正式使用前也需要对仪器的重要性能指标如波长的准确度、吸光度的准确度以及吸收池的光学性能等进行检查或校正。分光光度计的校正从下面三个方面着手：
氢灯或氚灯的发射谱线中有几根原子谱线，可作为波长校正用，常用的又486.13nm(F线)和656.28nm(C线)。
稀土玻璃(如镨钕玻璃、钬玻璃)在相当宽的波长范围内有特征吸收峰，可以很方便地用来检查和校正分光光度计的波长读数。某些元素辐射产生的强谱线也可以用来检查和校正波长，如汞等的546.1nm是强绿色谱线，钾的776.5nm。铷的780.0nm以及铯的852.1nm都可以应用。在可见光区校正波长的最简单方法是绘制镨钕玻璃的吸收光谱。
苯蒸气在紫外区有很明显的吸收峰。用它来检查波长读数也是非常方便的。只要在吸收池内滴一滴液体苯，盖上洗手池盖，待苯挥发充满整个吸收池后，即可测绘苯蒸汽的吸收光谱。这是个很实用的标准波长校正器。
吸收度的校正
某些物质如硫酸铜、硫酸钴铵、铬酸钾的标准溶液，可以用来检查或校正分光光度的吸光度标度，其中以铬酸钾溶液应用最为普遍。在25℃时，把0.0400g铬酸溶解在1L的0.05mol/LKOH溶液中，将该溶液盛在1cm厚的吸收池内，测定其再不同波长下的吸光度。注意：若在溶液中含杂质，则对吸光度有影响。这种校正方法适用于紫外及可见光区。
吸收池的校正
校正吸收池的方法如下：在吸收池A内装入试样溶液，在吸收B内装入参比溶液。测量试样的吸光度，然后倾出吸收池内的溶液，洗净吸收池。再分别在吸收池A内装入参比液，在吸收池B内装入试样溶液，测量吸光度。要求前后两次测得的吸光度差值应小于1%。在校正吸收池时，应多选择几个波长测量吸光度，得到的校正值可供以后实验中使用。