分子所处的外界环境，如温度、溶剂、pH、荧光熄灯灭剂等都会影响荧光效率，甚至影响分子结构及立体构象，从而影响荧光光谱和荧光强度。了解和利用这些因素的影响，可以提高荧光分析的灵敏度和选择性。
1、温度温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。在一般情况下，随着温度的升高，荧光物质溶液的荧光效率和荧光强度将降低。这是因为，当温度升高时，分子运动速度加快，分子间碰撞概率增加，使无辐射跃迁增加，从而降低了荧光效率。例如，荧光素钠的乙醇溶液，在0℃以下，温度每降低10℃，在荧光效率增加3%，在—80℃时，荧光效率φf为1。
2、溶剂同一物质在不同溶剂中，其荧光光谱的位置和强度都有差别。一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增大而长移，荧光强度也有增强。这是因为在极性溶剂中，π→π*跃迁需要的能量差ΔE小，而且跃迁概率增加，使紫外吸收和荧光波长均向长移，强度也增强。
溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般式温度上升，溶剂粘度变小，因此温度上升荧光强度下降。
3、pH的影响当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响，这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同，在不同酸度中分子和离子间的平衡改变，因此荧光强度也有差异。在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式，也就有相应的pH范围，一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。
苯胺在pH为7~12的溶液中主要以分子形式存在，由于—NH2为提高荧光效率的取代基，故苯胺分子会发生蓝色荧光。但在pH13的溶液中均以苯胺离子形式存在，故不能发射荧光。