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概述
流动相的离子强度对RP?HPLC中抗生素色谱峰形的影响
概述
离子强度
离子强度（ionicstrength）I等于溶液中每种离子i的质量摩尔浓度（mi）乘以该离子的价数（zi）的平方所得诸项之和得一半。
I=1/2*∑b(B)【z(B)】2(2为z(B)平方).
流动相的离子强度对RP?HPLC中抗生素色谱峰形的影响
摘要：在反相高效液相色谱(RP?HPLC)过程中，流动相的离子强度可显著影响可解离的化合物如抗生素的色谱峰形，原因在于流动相的离子强度较低时，色谱填料的固定相易于过载，使离子化的化合物的色谱峰形呈典型的过载特征——峰形接近直角三角形。随着进样量的增加，色谱区带中高浓度的前半部的保留时间减少，但色谱区带均在同一时刻结束，色谱峰的拖尾因子及峰宽均显著增加，同时被测物与有关物质间的分离也随之变差。选择合适的缓冲盐并适当地增加流动相的离子强度即可显著改善抗生素的色谱峰形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均随之降低，同时被测物与有关物质间也更加易于分离。
关键词：RP?HPLC；抗生素；色谱峰形；流动相；离子强度
InfluenceoftheionicstrengthofmobilephaseonpeakshapeofantibioticsinRP?HPLC
LiuHao,WangHong?wu,DingJian?yinandQiuShi?lin
(ShanghaiInstituteforFoodandDrugControl,Shanghai200233;TheNationalEngineeringResearchCenterforUrbanPollutionControl,TongjiUniversity,Shanghai200092)
ABSTRACTTheionicstrengthofmobilephasecansignificantlyaffectthepeakshapeofionogeniccompoundssuchasantibioticsinreversed?phasehighperformanceliquidchromatography(RP?HPLC).Theinfluencemaybeattributedtooverloadingofionogenicanalytesinlowerionicstrengthmobilephase.Insuchphase,peakbecomesincreasinglyright?angledtriangleinshapewithincreasingsampleloadtogetherwithincreasingpeakwidthandtailing.Theretentiontimeofthehigh?concentrationfrontdecreaseswithincreasingsampleload,whiletheendofthepeaktailhasaconstantretentiontime,equaltothesymmetricalanalyticalpeak.Duetoconsiderablyworsepeakshapes,poorerresolutionbetweenthemaincomponentanditsrelatedsubstancesmightbeobserved.Withtheoptimalbufferandtheincreaseofionicstrength,significantimprovementinpeakshapeofantibioticscouldbeachievedandconsequentlyadecreaseinthetailingfactor,anincreaseintheapparentcolumnefficiencyaswellasanefficientresolutionwereobtained.
KEYWORDSRP?HPLC;Antibiotics;Peakshape;Mobilephase;Ionicstrength
据统计，约80%的药物含有碱性官能团，故碱性化合物的反相高效液相色谱(RP?HPLC)行为在色谱学界始终是一个引人注目的研究课题，而具有不同pKa值的碱性药物的RP?HPLC分离在药学界的重要性正日益被关注［1］。然而，由于碱性化合物的保留可随着流动相pH值的不同而产生显著的变化，因而它们的RP?HPLC分离通常具有一定的难度。在某些pH范围内，碱性化合物的色谱峰拖尾，表观柱效(理论板数，n)较低，其原因可能包括色谱柱的过载、碱性化合物与填料表面残余硅醇基的相互作用以及较慢的吸附?解吸附动力学等。绝大多数抗生素同时含有碱性和酸性基团，多为亲水性的两性化合物，故其RP?HPLC行为远较通常的碱性化合物更为复杂。我们在应用现行各国药典［2～4］进行抗生素RP?HPLC分析时发现，有些抗生素的色谱峰形异常——峰形展宽并接近直角三角形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均较大，有时甚至影响到被测物与有关物质间的分离。囿于目前的填料制造水平，以硅胶为基质的反相键合相填料的表面实际上是不均匀的，固定相中不可避免地含有少量高能量位点(sites)，这些高能量位点易为可解离的(甚至中性的)化合物所过载(overloading)［5，6］。此外，解离的化合物在固定相表面的相互排斥作用以及较难渗透进入疏水性的固定相中也是可能的原因［7］。众多实验结果已经证实，在线性色谱(linearchromatography)领域，采用RP?HPLC分离可解离的(尤其是碱性的)化合物时色谱柱易于过载，甚至低达10ng(相当于10-6，进样10μl)的碱性化合物也可使常规色谱柱(150mm×4?6mm)的表观柱效明显降低；减少进样量则可改善色谱峰形并使表观柱效显著增加；过载效应可随着流动相的离子强度(c)的增加而逐渐减弱［8～12］。本课题选取了几个具有代表性的抗生素品种，初步研究了流动相的离子强度对RP?HPLC中抗生素色谱峰形的影响。