显微操作技术

  新闻专员 ·  2010-01-09 09:58  ·  13684 次点击
是指在高倍复式显微镜下,利用显微操作器(micromanipulator),这是一套能控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置,用来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等,像是桃莉羊的产制就是运用细胞核移植技术达成的;而基因转殖(genetransfer)指的是将选殖之外源基因藉由导入体细胞并能稳定的嵌入宿主动物之生殖细胞染色体中之一门技术,基因转殖动物被定义为经由人为的方式将外源基因引入体内而引起基因改变之动物,并可将遗传特质传递至接续的每一世代中。产制基因转殖动物可利用基因显微注射(genemicroinjection)、胚干细胞(embryonicstemcells,EScells)、精子载体(spermvector)、反转录病毒感染(retroviralvectorinfection)及体细胞核移置(somaticcellnucleartransfer)等方法达成,其中显微注射为目前应用最普遍之方法之一。显微注射法(microinjection)是利用管尖极细(0.1至0.5μm)的玻璃微量注射针,将选殖之外源基因片段直接注射入原核期胚或是培养的细胞中,然后藉由宿主基因组序列可能发生之重排(rearrangement)、删除(deletion)、重复(duplication)或易位(translocation)等现象而使外源基因嵌入宿主之染色体内。这种显微注射术的程序,需有相当精密的显微操作设备,于制造长管尖时,需用微量吸管拉长器(micropipettepuller),注射时需有固定管尖位置的微量操纵器。这种技术的长处为任何DNA在原则上均可传入任何种类的细胞内。此法已成功的产制包括小鼠(mouse)、鱼、大鼠(rat)、兔子及许多大型家畜,如牛、羊、猪等基因转殖动物。以显微注射法转殖之外源基因较无长度上之限制,目前已证明数百kb之DNA片段均可成功产制出基因转殖动物。而其缺点为其设备经密昂贵、操作技术需要有相当时间的练习,及每次只能注射相当有限的细胞。

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