关于高效液相色谱的色谱柱使用的注意事项
连云港市计量测试所韩锦屏
色谱柱在HPLC中是非常关键的部件。一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了。色谱柱是消耗品，有一定寿命，使用中也非常容易出问题。普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年。使用不得当用两、三个月就可能损坏。所以使用中应该非常注意。
1.
在使用一根新的色谱柱之前，一定要看柱说明书，将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚。接触最多的是C18色谱柱，它对试剂应用的范围非常广，甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用。但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求，有的色谱柱只能使用水，不能使用有机试剂，有的色谱柱只能使用有机试剂，而且使用指定是某一种，象GPC色谱柱。这些事情一定搞清楚，如果流动相使用不对，柱子很快会损坏。另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子。
2.
柱子是有方向的，柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向。当换新柱子时，不要马上就接到检测器上使用。将柱子入口处接在进样器的出口，柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器，按箭头方向垂直朝上，用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右。将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上，否则小气泡跑到检测池里，就很难赶走，检测器产生噪声信号，基线也就走不好。
3.
关于压力对色谱柱的影响：常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间，生产厂家不同，耐压也不同，从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高，但柱效高低不仅与耐压的高低有关，还有其他因素。从使用中看，在保证柱效的同时，耐压不要太高，仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力，检查柱压力应分段检查。压力过高不仅柱子受不了，其他的部件也会出问题，例如自动进样器。
4.
色谱柱对pH值是有一定的使用范围。以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH。
耐碱性能不太好，流动相的pH大于8会使硅胶溶解。有些分析条件须用碱性流动相，这时一定要选耐碱性好的色谱柱，流动相的PH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。
5.
色谱柱的使用温度不要超过说明书上规定的温度。一般使用温度在60℃以下，典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间，高温使用会缩短柱寿命。
6.
色谱柱使用过程中压力的骤然波动，温度的骤然变化或机械撞击都会对色谱柱床产生影响。进样过程中，进样阀转动太慢引起压力波动；流速的突然增大都应在日常分析中尽量避免。一般说来，在低柱压下操作可大大减少由压力波动造成的柱效损失。这种问题是不可修复的
7.
色谱柱内存在缓冲盐时，如果用高浓度甲醇或其他有机溶剂冲洗色谱柱，会导致柱内缓冲盐结晶析出，造成柱压明显升高。出现该问题时，反相色谱柱首先应使用20%左右有机溶剂的水溶液低流速冲洗色谱柱，使柱内的盐全部溶解冲出，再换成高浓度甲醇或其他有机溶剂的流动相。
8.
样品的预处理，许多样品，特别是生物样品与中药材，其组分复杂，样品预处理是影响色谱柱寿命的关键。样品经过常规的前处理后，进样前还需进行以下步骤：a.用微孔过滤膜出除去样品中的不溶颗粒，以免赌塞柱头筛板及柱内填充床，使柱压升高。b.将样品用流动相溶解或用与流动相互溶的溶剂溶解。
9.
为了保护色谱柱，在色谱柱前接了一个保护柱。保护柱通常是比较短的分析柱，通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质，达到保护色谱柱的目的。保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质。为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱结果的改变，最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱。
10.
色谱柱用合适的溶剂保存，若为C18柱推荐用甲醇保存。在日常分析中，流动相含有的不纯物质和样品中的某些组分会吸附在色谱柱中，随着分析时间的延长，吸附量会越多，所以柱子要经常清洗，一般柱子使用一两个星期洗一次，柱子不同清洗的流动相就不同，C18柱子常用甲醇清洗，不要用水清洗这对柱子不好，一般清洗3～4小时，另外色谱柱长时间不用，存放时要将柱子洗干净，脏柱子放置时间越长，柱效会大大降低。存放时，柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈），两端封死。
近几年化验室用的液相色谱仪是越来越多，所用色谱柱的种类也越来越多，问题出的也较多，值得注意的是，不论怎样对色谱柱进行处理，一般都很难恢复到原有水平，因此，大家再使用色谱柱之前一定要看说明书，把以上几项问题搞清楚后再使用，尽量避免发生如上问题。