HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法
1、样品量不足，解决办法为增加样品量
2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4、检测器衰减太多。调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查;
2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查;
3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池)。这时，如果柱压仍不下降，再检查;
4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?
1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化
漂移现象
1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定
2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
快速变化现象
1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
HPLC仪器问题
1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因?
答：流速设定过高;流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞;流动相粘度过大;柱温过低;缓冲盐结晶;压力传感器故障。
2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决?
答：a.流动相有溶解气体;用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气
b.单向阀堵塞;取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物
c.泵密封损坏，造成压力波动;更换泵密封
d.系统存在漏液点;确定漏液位置并维修
f.柱后产生气泡;流通池出液口加负压调整器
g.检测器没有设定在最大吸收波长处;将波长调整至最大吸收波长处
h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时;用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
3、接头处为何经常漏液，如何处理?
答：接头没有拧紧;拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。接头被污染或磨损;建议更换接头。接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。
4、进样阀漏液是如何造成的?
答：a.转子密封损坏;更换转子密封
b.定量环阻塞;清洗或更换定量环
c.进样口密封松动;调整松紧度
d.进样针头尺寸不合适，一般是过短;使用恰当的进样针(注意针头形状)
e.废液管中产生虹吸;清空废液管
谱图问题
1、问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除?
答：a.筛板阻塞;反冲色谱柱、更换进口筛板
b.色谱柱塌陷;填充色谱柱
c.有干扰物质的存在;使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱
e.流动相PH值不合适;调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
f.样品与填料表面的溶化点发生反应;加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱
2、问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除?
答：保护柱或分析柱污染;取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相;改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。
3、问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么?
答：反相模式，二级保留效应;
a.加入三乙胺(或碱性样品)
b.加入乙酸(或酸性样品)
c.加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
d.更换一支柱子
4、问：保留时间的波动有几种可能的原因?
答：温控不当;调节好柱温。流动相组分变化;防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡;在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
高效液相色谱仪操作步骤：
1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)、打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。
4)、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)、设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)、填写登记本，由负责人签字。
注意事项：
1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)、压力不能太大，最好不要超过2000psi。