高效液相色谱系统操作规程(Waters 600E-2487)
Alu · 2011-05-30 21:48 · 46285 次点击
1.目的
规范Waters输液泵)、Waters在线脱气机、Rheodyne7725i手动进样阀、Waters2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成,另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。
5.程序
5.1.准备
5.1.1.使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相(应足够;流动相必须用0.45μm滤膜过滤)、样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。
5.1.2.通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2.开机和泵操作
5.2.1.开机
5.2.1.1.接通UPS的电源,依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器,待检测器自检结束显示测量状态时,打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2.打开Millennium32软件,按「Login...」,输入用户名和密码,按「OK」注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目,右击『RunSamples』图标,选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。
5.2.2.更换溶剂
5.2.2.1.打开600E泵后,转动进口集合管阀手柄(以下简称手柄)至RUN位置;
5.2.2.2.将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂,向右打开参照阀(断开柱和进样器);
5.2.2.3.按[Direct]键使其显示直接控制屏幕,设流速为1ml/min(梯度配比阀在0ml/min时不工作);
5.2.2.4.选择欲使用的某一溶剂通道,设其比例为100%,其它为0%;
5.2.2.5.将输液管从原有溶剂瓶中取出,放入一干净的空瓶中;
5.2.2.6.逆时钟转动手柄至DRAW位置,用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂;
5.2.2.7.再将输液管放入新溶剂瓶内,继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止;
5.2.2.8.转动手柄至RUN位置,将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
5.2.2.9.重复5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。
5.2.3.排气泡
5.2.3.1.打开参照阀,换流动相为100%超纯水,设流速为10ml/min(注意:确认参照阀是打开的,否则可能损坏安装好的柱);
5.2.3.2.转动进口集合管阀手柄至DRAW位置,用启动注射器抽出约10ml水;
5.2.3.3.顺时钟转动手柄至INJ位置,缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出(注意不要将气泡注入泵中);
5.2.3.4.按[Stopflow]屏幕键停泵,关上参照阀。
5.2.3.5.如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下泵出口管,用塑料管连接至塑料烧杯中,设流速为10ml/min,冲洗2~5min(或更长时间)后停泵,重新接上柱。
5.3.平衡系统(分两种情况进行)
5.3.1.等度模式
5.3.1.1.每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min,以超纯水冲洗系统10min。
5.3.1.2.检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液,如漏液应予以排除。
5.3.1.3.观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应在平均值的5~10%以内。如超出此范围,可初步判断为柱前管路仍有气泡,重复5.2.3.下的步骤。
5.3.1.4.压力波动平稳后,换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前,让最少5~6倍柱体积的流动相通过系统。
5.3.1.5.在QuickSet窗口下的InstrumentMethod档内选择所需的仪器方法,按「Monitor」(此后泵由软件控制),观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移