建立色谱检测方法的技巧讨论
1开埸白
1.1交流内容
色谱技术在药品标准中的应用分类和优势简介
对药品标准中有关色谱检测方法的几个问题的讨论
建立色谱检测方法(GCLC)的经验与技巧
1.2界定本处的色谱检定方法为气相色谱和色谱柱的选择(参见各色谱柱供应商讲座内溶)(补充)特殊色谱柱的表达问题
LC流动相:pH值与离子对试剂不匹配，pH值与色谱柱不匹配，有机溶剂的极性(量)与色谱柱不匹配，流动相与样品溶剂不匹配，流动相的有机溶剂量与检测波长不匹配
检测波长选择:在有关物质检查中，习惯追最大吸收，
3.2供试品溶液制备中存在的问题
抽取方法&条件不合理,慎用固相萃取法;残留溶剂测定采用超声波溶解提取;回流提取，索氏提取不研究提取时间，提取温度;
取样量不合理,
提取溶剂选择不合理:GC测定样品的溶剂沸点偏高，可以用无毒害的溶剂却迭择有毒害的溶剂，不对溶剂进行比较选择，
3.3测定法
指纹图谱检测中对顶空进样的不公证待遇;
溶剂与色谱柱不匹配:如GC法中，极性溶剂__WAX系列毛细管柱;
LC检测中溶剂与流动相不匹配:反相色谱法中，100%有机溶剂__低极性流动相;
进样方法&条件不合理:
计算方式不合理:中药检验中不宜强求内标法，无故放过可用归一化法的机会。
4建立色谱检测方法(GCLC)的经验上与技巧
4.1建色谱检测方法的要求
供试品溶液制备
取样量的合理性研究，提取方法的选择，溶剂的选择，提取溶剂的选择
色谱条件
样品收集范围应保证选择性考察;分离模式的选择应含有主要指标，如分离度、重复性、可操作性、运行成本和其它物殊要求;分离条件(参数)的优化，
方法学考察指标应100%按要求完成
4.2气相色谱检测方法建立技巧
(1)低沸点物质测定时，动态顶空与静态顶空等进样技术的应用，
(2)鉴别高沸点物质时，固相徽萃取技术的应用
(3)动态顶空在静态顶空法方法学评价中的应用
(4)尽可能使用归一化法测定限量
中药供试样品为溶液时，宜使用外标法，
(6)重视标准加入法
(7)最低理论板数
在完成两根色谱柱的耐用性实验后，根据R═(k2-k1)N½/4(1+k1)，推算
得到经验公式N═36(t2/(t2-t1))2，再计算其平均值，此时令R为1.5t0为1。
评价理论板数时，可根据t0变化规律判断设置是否合理
(8)样品浓度推算:
m取样量>V稀释倍数×K保险系数×L定量限/(C杂质总限度×I进样体积)
4.3液相色谱检测方法技巧
(1)中药供试样品为溶液时，宜使用标准加入法
(2)中药供试样品为溶液，重视标准加入法
(3)复杂样品中微量成分的限量测定可活用固相萃取
(4)最低理论板数
在完成两根色谱柱的耐用性实验后，根据R═(k2-k1)N½/4(1+k1)，推算
得到经验公式N═36(t2/(t2-t1))2，再计算其平均值，此时令R为1.5t0为1。
评价理论板数时，可根据t0变化规律判断设置是否合理
(5)有关物质检查中样品浓度推算:
m取样量>V稀释倍数×K保险系数X杂质个数×L定量限/(C杂质总限度×I进样体积)
(6)关注微波溶解样品的适用范围
(7)复杂样品检测中，注意甲醇，乙腈的联合使用
(8)复杂样品的指纹图谱测定中，注意离子对的联合使用
(9)十二烷基磺酸在有机基体C18键合柱中的妙用
(10)注意复合色谱柱在中药样品的应用
(11)DAD在指纹图谱检测的信息量评估中的妙用
(12)ELSD在有关物质检查的响应评估中的应用
(13)DAD在有关物质检查的响应评估中的妙用
(14ELSD，DAD在工作对照品含量定义中的联合应用
5结束语
5.1参考文献
(1)L.R森德尔J.J.柯