色谱纸层析基本操作技术

  Baike ·  2011-07-20 09:08  ·  36998 次点击
滤纸
滤纸纤维一般能吸附29~25%的水分,其中6~7%是以氢键与纤维素的羟基想结合,在通常条件下,不易除去,所以和水相混合的溶剂仍然形成两相。在纸色谱法中,这种水分组成固定相,而纤维间空隙能通过流动相。
滤纸一般选用中速滤纸,也可结合展开溶剂来考虑。以丁醇为主的溶剂系统黏度较大,展开速度慢;相反,石油醚、氯仿等为主的溶剂则展开速度较快。可据此结合实验要求选择快速、中速或慢速的滤纸。滤纸厚薄的选用,一般定性分析用较薄的滤纸,厚质滤纸则用于制备。当溶质为弱酸、弱碱或两性物质时,pH对色谱影响很大。这是因为当溶质成游离状态或成盐时,在两相间的分配系数差别很大,因此pH应保持恒定。恒定pH的方法,一种是展开剂采用一定pH的缓冲液,另一种是将滤纸经缓冲液处理,用中性溶剂展开。
展开剂
展开剂可以是单一溶剂,也可以是混合溶剂。选用的溶剂系统应对被分离溶质有一定的溶解度,既不要使它们跑得太快(Rf=1),也不要使它们留在原点不动(Rf=0)。可取溶解度较大的溶剂与较小的溶剂按不同比例配制,有时还须加第三种溶剂,以调节系统的pH和使前两种溶剂的互溶度增加。
操作方法
可用供熔点测定用的玻璃毛细管点样。如需定量,则可利用市售的血球计数管,将头磨尖,即可应用。必要时可用水银校正读数。试样应点于距纸底边约2cm的起点线上,每点间距2cm左右,点的大小一般为其直径不超过0.5cm,也可点成3—5mm横的长条。

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