超薄切片技术
(1)固定
要求:保持细胞水平超微和分子水平的形态结构及性质.
固定剂:锇酸(OsO4)和戊二醛等
物理方法如高频微波
操作:处死和取材快速
(2)包埋
目的:支撑样品,在切片和观察时保持完整
包埋剂要求:不显示本身结构;聚合时不收缩;有良好的机械性能;易被电子穿透
包埋剂:环氧树脂
脱水:包埋前用丙酮或乙醇脱水
(3)切片
切片厚度:40-50nm
切片机:样品杆切片刀(玻璃刀或钻石刀)
切片放在覆有支持膜的载网上观察
(4)染色
样品中的不同成分对各种染料有不同的亲和性
用重金属盐染色,形成明暗反差
通过电子束振幅的改变观察到黑白图像