怎样选择适合的实验室成像仪?

  Brad ·  2011-12-22 16:53  ·  26375 次点击
选择成像系统的“四项基本原则”
原则一:“只选对的,不选贵的”
核酸电泳凝胶:
一般此类凝胶都采用EB染色、紫外激发,而且凝胶较小。推荐采用一般的凝胶成像设备即可完成。
蛋白电泳凝胶:
一般此类凝胶采用考染或银染,白光透射成像。对于小型凝胶您可以选择一般的凝胶成像设备,但是对于大型凝胶,特别是双向电泳凝胶,由于CCD拍照成像会有几何扭曲,而且透镜效应也会导致不同区域的信号强度差异,另外CCD拍照也无法保证不同凝胶的成像参数保持一致,因此扫描成像是最好选择。
转印膜:
这个稍微有些复杂。一般转印膜有比色法显色、同位素、化学发光和荧光等不同检测手段。比色法显色就是产生有颜色的条带或斑点,一般采用普通的凝胶成像设备即可;同位素可以采用压胶片曝光的方法,但是费时、费力而且容易过饱和,比较通用的方法是由FujiFilm在1981年发明的磷屏成像技术,获得信号潜影的磷屏通过激光扫描就可以获取同位素的信号。而化学发光是目前最常用的蛋白印迹的检测手段,无疑,冷CCD拍照成像对这种微弱的光信号是最合适的。
原则二:实践是检验真理的唯一标准
原则三“只比对的,不比费的”
我们崇尚实践,然而,现实经常不配合我们,或者是没有Demo机,或者是有时我们还真的很难根据实验结果分辨出性能上的差异,这时候第三项原则将至关重要。
对于扫描成像而言,灵敏度一般不是问题,我们最关注的应该是分辨率,当然分辨率只要达到我们的要求即可,对于小型的凝胶、膜和微孔板来说,一般分辨率在25um左右应该是足够了。在满足分辨率后,一个更重要的参数摆在我们的面前,那就是动态范围,简单的说,动态范围决定着你能否同时在一张胶上同时看到强的信号和弱的信号,而且他们之间保持比较好的定量关系。一般动态范围采用数量级来表示,这个数越大,表明动态范围越宽。
对于激光扫描成像系统,情况就复杂一些。从激光器、滤光片到分光镜和检测器还有好多需要考虑和比较的。同样限于篇幅,以后在做详细介绍。
下面主要介绍实验室最常用的凝聚成像仪的参数选择。根据原则一,如果您主要用它来拍普通核酸胶或蛋白胶,那么几乎市场上所有的成像仪都可以很好的满足您的需求,这时除了价格这个决定因素外,能比较的也就是一些诸如“操作是否简便、外形是否时尚”等无关痛痒的指标了。真正需要花心思考察的可能就是准备做化学发光的用户,他们对敏感度要求高,同时还要求比较宽的动态范围。
要想捕获到微弱的化学发光,需要上佳的CCD相机和镜头。一般来说,CCD相机的冷却温度和背景噪音息息相关,温度越低,噪音就越低。因此,-25℃的绝对制冷温度是对相机的第一个要求(更低的温度,噪音降低效果不明显,而量子效率又会受很大影响);另外,较大的像素能够提供更高的捕光效率;所以对于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。镜头的参数就简单了,由于我们只需要观察近距离的样品而且一般可以调整样品位置(有些厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本无需选择长镜头或者变焦镜头;但是,由于我们需要检测微弱的化学发光,镜头的光圈则至关重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比关系,因此我们一般需要选择光圈F值尽量小的镜头。另外,如果镜头是电动的,我们可以省却打开机箱,反复手工调整光圈和聚焦等的烦恼。
其他我们需要考虑的包括光源、滤光片和暗箱等部件。光源的种类和发光的均一度,滤光片的数量和暗箱的遮光效果等均在我们的考虑范围之内。当然,一般如果成像仪的CCD和镜头配置不错,一般这些部件也不会太差。
原则四“附加值很重要”
很多用户认为,买来后摆在实验室使用的只是一台仪器而已。其实,事实远不是这样。买仪器来是为了使用,而能否用好,除了我们自己的聪明才智和勤学苦练之外,厂家的技术支持必不可少。因此,要买就买原厂货已经成为很多用户的共识,因为这样就可以享受到厂家现场技术支持和指导。
仪器不但给我们提供数据,还会不时给我们找麻烦。仪器的损害和停机是使用者最不愿意看到的。选对了厂家,您可能逢凶化吉;而如果很不幸,您选错了,那么我只能对您当时的状况表示极大的同情。

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