【摘要】目的建立接骨胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱：HypersilC18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-1%冰乙酸(33∶67),检测波长为320nm,流速为1.0mL/min。结果阿魏酸在0.12～1.2μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.9999),平均回收率为99.6%,RSD＝1.8%。结论该方法简便、准确,可用于控制接骨胶囊制剂的质量。
【关键词】接骨胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofFerulicacidinJieguCapsule.MethodThesamplesweredeterminedbyRP-HPLConaHypersilC18column(4.6mm×250mm,5μm).Themobilephaseconsistedofmethanoland1%aceticacid(33∶67).Thedetectionwavelengthwasat320nmandtheflowratewas1.0mL/min.ResultsThecalibrationcurvesofFerulicacidwaslinearintherangeof6～60μg/mL(r＝0.9999).Theaveragerecoverywas99.6%andRSDwas1.8%.ConclusionThemethodissimpleandaccurate,whichcanbeusedforthequalitycontrolofJieguCapsule.
Keywords：JieguCapsule；Ferulicacid；HPLC；contentdetermination
接骨胶囊是在接骨片的基础上研制的新制剂,由四号铜粉、川芎、制川乌、当归、乳香(醋炙)、没药(醋炙)、自然铜(煅)7味中药组成,具有散瘀、活血、止痛的功效,临床用于跌打损伤、筋伤骨折、瘀血肿痛。阿魏酸为本品有效成分之一,且含量较高。本试验采用高效液相色谱法对接骨胶囊中的阿魏酸进行了含量测定,为控制本品的质量提供依据。
1、仪器与试药
日本岛津高效液相色谱仪LC-6A系列；LC-6A溶剂输送泵；SPD-6AV紫外-可见分光检测器；NASTA色谱工作站；7125型定量进样阀。接骨胶囊(自制,规格：0.2g/粒,批号070810、070812、070814)；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110773-9910)。甲醇为色谱纯,醋酸为分析纯,水为重蒸水。
2、方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验
HypersilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-1%冰乙酸(33∶67,v/v)；检测波长：320nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min。在此条件下,阿魏酸与其他组份分离度大于1.5,按阿魏酸峰计算理论塔板数不低于2000,色谱峰的对称因子为0.95～1.05。
2.2溶液制备
2.2.1对照品溶液的制备
取阿魏酸对照品适量,精密称定,用甲醇配成每1mL含0.06mg的溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
取接骨胶囊50粒,取研细内容物约2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-水(50∶50,v/v)25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率200W,频率40kHz)30min,放冷,再称定重量,用甲醇-水(50∶50,v/v)补足减失的重量,混匀,滤过,取续滤液,即得。
2.2.3阴性对照溶液的制备
按照处方比例和制备工艺,制备不含川芎和当归的阴性模拟制剂,照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。
2.3分析方法验证
2.3.1专属性考察
取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液,在上述色谱条件下进样20μL,记录色谱图,结果见图1。由色谱图知,阿魏酸峰保留时间约15.6min,阴性对照样品溶液在阿魏酸峰位置无干扰峰,阿魏酸与其他组份可完全分离。
2.3.2标准曲线制备
精密吸取阿魏酸对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0mL,分别置10mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀释至刻度,摇匀,各进样20μL,按上述色谱条件进行测定。以阿魏酸浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,计算得回归方程：Y＝82824X－560.95,r＝0.9999,表明阿魏酸在0.12～1.2μg范围内线性关系良好。
2.3.3精密度试验
精密吸取阿魏酸对照品溶液2.0mL,置10mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀释至刻度,摇匀,进样20μL,重复进样5次,按上述色谱条件进行测定,结果阿魏酸峰面积RSD＝1.1%。
2.3.4重复性试验
取同一批样品(批号070810)约2g,精密称定,共5份,按“2.2.2”项下方法操作,测定结果的RSD＝1.7%。
2.3.5稳定性试验
取同一供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、24h,精密吸取20μL,注入液相色谱仪,测定阿魏酸峰面积,RSD＝1.6%,说明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.3.6加样回收率试验
取已知含量的样品(批号070810)约1g,精密称定,共9份,分别加入1.5、3.0、4.5mL阿魏酸对照品溶液,按“2.2.2”项下方法操作,按上述色谱条件测定,结果见表1。表1接骨胶囊中阿魏酸的加样回收率试验结果(略)
2.4样品测定
精密吸取供试品溶液20μL,按上述色谱条件测定,3批样品测定结果见表2。表23批样品的阿魏酸含量测定结果(略)
3、讨论
样品提取方法及条件考察分别采用甲醇-水(50∶50,v/v)、甲醇、流动相为溶剂,分别超声提取15、30、60min,比较阿魏酸的含量,结果表明,样品用甲醇-水(50∶50,v/v)超声提取30min较为适宜。另外,本试验曾用甲醇-水(50∶50,v/v)加热回流,结果阿魏酸含量与超声提取30min比较没有明显提高,但因加热回流操作繁琐,故采用超声提取为样品提取方法。
本试验采用高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸的含量,方法简便,结果可靠,可作为该制剂的质量控制方法。