酒曲中含有大量的微生物，其中有霉菌、酵母和细菌，在液体中，酵母生长比霉菌快，而酸性培养基酵母比细菌生长更适宜。因此，利用这一特性，可先将酒曲中的霉菌与细菌数目减少，甚至消除(生理纯化法)，然后用平板法分离酵母。此法较为简单。
1．配制培养基
(1)酸性蔗糖豆芽汁(加乳酸0.5%)培养液分装试管，灭菌。
(2)蔗糖豆芽汁琼脂，分装试管和三角瓶，灭菌。
2．分离
(1)用灭菌过的小刀，割开曲块，挖其中米粒大小1块投入酸性培养液中，摇动后将该管置于25℃恒温培养箱(上海和呈生产)中培养，两天后转到另一管酸性培养液中，见到霉菌丝球即行剔除。然后每隔两日转接一次，一周后分离。
(2)最后将转接试管酸性培养液中的酵母直接用稀释平板法进行分离，培养后，分别移植单独的酵母菌落于蔗糖豆芽汁斜面上，贴上标签，标明菌株编号以及移植日期，置于培养箱中培养，待长出、分纯后即可进行鉴定。