复方苯甲酸软膏主要成份是苯甲酸和水杨酸,两药配制具有抑制真菌生长的作用，临床上主要用于治疗浅部真菌病,包括手癣、脚癣、体癣、股癣等皮肤癣症。各制剂测定大多采用容量分析法测定酸的含量。本文采用高效液相色谱法，同时测定复方苯甲酸软膏中苯甲酸及水杨酸的含量
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪：安捷伦1100系列高效液相色谱仪。TRANSSONIC460/H超声仪，SartoriusPH计(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，VORTEXQilinbeier震荡器(江苏海门市其林尔仪器制造有限公司)，超纯水器(Milipore公司)。
1.2试药
苯甲酸、水杨酸均为本院制剂室提供。甲醇(色谱纯,北京化学试剂公司)，磷酸氢二钠(分析纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)。
2实验方法
2.1色谱条件
色谱柱：Zorbax-SbC184.6×250mm，5μm，流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠∶甲醇=60∶40(用磷酸调节pH=5.2)，流速：0.8mL/min，检测波长：240nm。
2.2标准液配制
精密称取苯甲酸、水杨酸各1mg，置10mL容量瓶中，加甲醇适量，使苯甲酸、水杨酸溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，为储备液。
2.3样品测定方法
精密称取复方苯甲酸软膏0.5g。置50mL容量瓶中，加约40mL甲醇，置70℃水浴中，使凡士林溶解后，放冷，加甲醇至刻度。摇匀后，放入冰浴，使凡士林析出，抽取上清液用0.45μL滤膜过滤。滤液再用甲醇稀释后，进样10μL。
2.4空白对照实验
按复方苯甲酸软膏处方配制的空白软膏，按样品测定方法处理，结果显示，软膏中基质不干扰样品中苯甲酸和水杨酸的测定(见图1)。
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3结果与讨论
3.1标准曲线的制备
精密量取不同量储备液，用甲醇分别配制成含苯甲酸、水杨酸浓度为0.01mg/mL，0.02mg/mL，0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.2mg/mL的溶液，分别取10μL进样，以峰面积对浓度进行线性回归，结果表明，2种成分在上述范围内线性良好，回归方程为苯甲酸Y=36.7521+2453.1833x，R=0.9996。水杨酸Y=40.7945+23953.8458x，R=0.9996。最低检测浓度为200ng/mL。
3.2精密度实验
取高、中、底浓度分别为10.0mg/mL，50.0mg/mL，200.0mg/mL的样品，按标准曲线制定方法测定，在日内(间隔2h)重复测定3次;日间(第一天，第二天，第三天)重复测定3次。按标准曲线计算浓度(见表1，2)。
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3.3回收率
按复方苯甲酸处方(含苯甲酸12%、水杨酸6%)，精密配制成模拟制剂，按上述样品测定方法测定，并计算回收率。苯甲酸为98.31%(n=4)，RSD为0.79%;水杨酸为98.55%(n=4),RSD为1.62%(见表3)。
3.4样品测定
取3批样品(060630,060631,060633)，精密称
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取0.5g。置50mL容量瓶中，加约40mL甲醇，置70℃水浴中，使凡士林溶解后，放冷，加甲醇至刻度。摇匀后，放入冰浴，使凡士林析出，抽取上清液用0.45μL滤膜过滤。滤液再用甲醇稀释后，进样10μL按上述测定方法，分别进行测定，结果苯甲酸为95.00%，100.71%，96.17%，水杨酸为97.98%，95.00%，95.01%（见表4，n=3）。
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3.5提取溶剂的选择
根据苯甲酸，水杨酸在甲醇中易溶，基质凡士林在甲醇中几乎不容的性质，选用甲醇为提取溶剂，提取液放冰浴，使凡士林析出，再过滤进样。凡士林不干扰样品中苯甲酸和水杨酸的测定。本方法简单，重复性好，可用于医院制剂的质量控制。
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