胸腺素α1(Tα1)是Goldstein等最早从牛胸腺组织TF5中分离出来的一种多肽，含28个氨基酸，分子量3.108KD，等电点4.2。在临床上主要用于病毒性疾病、免疫缺陷性疾病和肿瘤的治疗。化学合成Tα1的分子结构与人体内源性Tα1完全一致，与生化提取Tα1相比，化学合成品产量高，便于进行严格的质量控制，高效低毒。反相色谱是对合成Tα1有关物质检查和含量测定的主要分离手段，为探讨各种反相分离因素对Tα1质量控制的影响，我们根据Tα1的氨基酸序列，合成27、21、14、7肽等Tα1的系列多肽，对其反相色谱分离条件进行优化，研究各种因素对Tα1及其系列多肽反相分离的影响。
1实验部分
1.1仪器和样品
安捷伦1100系列高效液相色谱系统;Symphony12通道多肽合成仪(ProteinTechnologies公司)。乙腈、三氟醋酸(TFA，Merk公司)，磷酸二氢钾、三乙胺为国产分析纯试剂，实验用水经MillQ纯水器净化。Tα1及其系列多肽(见表1)。
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1.2色谱条件
色谱柱1：ZORBAXEclipse4.6×150mm，5μm;色谱柱2：ZORBAXSB4.6×150mm，5μm。流动相1：A0.035mol/L磷酸二氢钾，用磷酸或氢氧化钠调pH至5.7，B：乙腈，0~25%B20min，梯度洗脱;流动相2：A0.1%TFA(v/v)水;B：0.1%TFA乙腈，0~30%B20min，梯度洗脱;流动相3：A1%冰醋酸，用三乙胺调节pH至6.5，B：乙腈，0~30%B，梯度洗脱。流速：1mL/min，测波长：214nm。
2结果和讨论
2.1不同缓冲体系对分离选择性的影响
分别用三氟醋酸、磷酸缓冲液和醋酸三乙胺三种流动相系统对Tα1系列多肽进行分离(见图1)。结果表明，三种流动相系统都能对Tα1系列多肽进行有效的分离，但杂质的峰数和出峰顺序不同。多肽混合物中含有多个天门冬氨酸和谷氨酸残基，这两种酸性氨基酸侧链在pH2左右的三氟醋酸流动相体系中完全游离，而在pH6.5的条件下则全部离子化，这种解离与非解离状态的变化将导致多肽与反相固定相间的相互作用不同，从而改变分离选择性，用不同pH磷酸缓冲液系统也验证这一结论。选择三氟醋酸缓冲体系的目的是使样品呈游离状态，增加其在系统中的保留。而磷酸缓冲液和
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Tα1系列多肽的分离没有明显的差别。
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