当归是常用中药之一，有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效。其成分有挥发油类：藁本内脂、正丁基芙内脂;香豆素类：蝉翼素、东莨菪素;有机酸类：阿魏酸、丁二酸、香草酸;糖类：果糖、酸性多糖;黄酮类;氨基酸;维生素和其他微量元素等都具有很高的药用价值。其中主要成分阿魏酸具有抗氧化和清除自由基作用，能有效抑制血小板聚集和血栓形成，用于治疗血管栓塞性脉管炎，急性脑血栓和偏头痛及动脉粥样硬化等症。高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)是中药质量控制研究中的常用方法，应用HPLC法测定当归中阿魏酸的含量已有报道，唐力英等以甲醇-水-冰醋酸为流动相，检测当归中阿魏酸含量，方法简便易行，但耗时较长;乔明等以水-正丁醇-冰乙酸为流动相，测定当归不同药用部位的阿魏酸含量;方法快速简便，但样品前处理操作较为费时，且分离效果较差，杂质干扰大;任占军等采用微波萃取的方法提高阿魏酸提取率，但是方法重现性有待改进。本文在针对上述情况，对检测当归中阿魏酸的样品前处理方法及色谱条件做深入研究，以甘肃产当归药材为对象，建立高效液相色谱法测定其中阿魏酸的含量方法;本方法简便准确、重现性好、分析时间短，7min内能完成检测，可为制定当归的质量标准提供参考依据。
1实验部分
1.1仪器与试药
Agilent1200Series高效液相色谱仪(Agilent公司美国);阿魏酸对照品(批号：110773-200611)，购于中国药品生物制品检定所;当归药材购于同仁堂药店,产地甘肃;乙腈为色谱纯,水为超纯水;其余试剂均为分析纯。
1.2色谱条件
色谱柱：ThermoODSHYPERSIL(250mm×4.6mm，,5μm)，流动相：乙腈-0.3%乙酸溶液(30∶70)，流速：1.0mL/min，检测波长：322nm，进样量为10μL，柱温：35℃，色谱图(见图1)。
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1.3对照品溶液的制备
准确称取阿魏酸对照品5.0mg，置于5mL量瓶中，加乙腈-0.3%乙酸溶液(30∶70)制成浓度为1.0mg/mL对照品储备溶液。
1.4样品溶液的制备
取当归药材，剪碎，准确称取10.1g，加入80mL70%乙醇，90℃水浴回流提取2次，每次2h，合并提取液，过滤待用。准确移取1mL提取液，加无水乙醇稀释10倍，微孔滤膜(0.45μm)过滤，滤液作为供试品溶液，避光保存。
1.5浓度曲线的测定
准确移取阿魏酸对照品储备溶液，用流动相稀释，分别制成浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0μg/mL阿魏酸对照品溶液，进样测定。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作标准曲线，得到回归方程:Y=58.985X+4.2348，r=0.9998。表明阿魏酸在0.1~10μg/mL质量浓度范围内具有良好的线性关系。以信噪比S/N=3计算方法检出限，阿魏酸含量的检出限为0.01μg/mL。
2结果与讨论
2.1实验条件的选择
2.1.1分离条件选择样品分离条件的选择参照《中华人民共和国药典》测定当归中阿魏酸所用的流动相进行试验，分别选用甲醇-0.085%磷酸、甲醇-0.3%乙酸、乙腈-0.085%磷酸和乙腈-0.3%乙酸为流动相考察分离效果，实验结果表明甲醇-0.085%磷酸和乙腈-0.085%磷酸为流动相时，峰形不对称，拖尾严重，且不能基线分离;甲醇-0.3%乙酸为流动相时分析时间长;乙腈-0.3%乙酸为流动相的效果最好,待测成分峰形对称，其他成分对测定无干扰。实验还考察不同比例的乙腈-0.3%乙酸为流动相的分离效果(见表1)，表明随着有机相的比例增大，样品的保留时间减少，有利于缩短分析时间，但当有机相比例大于35%时，拖尾较严重。所以综合各种因素，实验选择乙腈-0.3%乙酸(30∶70)为流动相。
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2.1.2样品前处理方法选择分别采用超声提取法、冷浸提取法和恒温水浴回流提取法提取当归中的阿魏酸，经反复实验证明以90℃水浴回流提取2次，每次2h的方法提取率最高。实验还发现用无水乙醇、乙腈、甲醇、水等不同溶剂稀释当归提取液，发现都会产生絮状沉淀;过滤后，经检测发现，无水乙醇稀释当归提取液，阿魏酸的含量无损失，故实验采用无水乙醇稀释样品后进行测定。
2.2样品的稳定性试验取同一供试样品溶液，分别于样品制备后0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h取样，按“1.2色谱条件”测定，以阿魏酸峰面积计算，RSD为1.68%，表明供试样品在24h内稳定。
2.3精密度试验
取同一批药材，准确称取6份样品，分别制备6份供试溶液，按上述方法平行测定阿魏酸含量，结果(见表2)。RSD为1.96%，表明方法精密度良好。
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2.4重现性试验
由不同的人员，按上述样品制备方法及色谱条件重复测定同一批药材样品6次，结果RSD为2.43%(n=6)，表明方法重现性较好。
2.5回收率试验
采用加标回收法，准确称取5份药材样品，分别加入0mg，1.4mg，3.5mg，6.9mg，13.5mg阿魏酸对照品，按样品溶液制备的方法制备样品，每个样品平行测定3次，取平均值，计算回收率(见表3)
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2.6样品测定
取甘肃产当归药材，分别制备5份样品，进样测定，测定结果(见表4)。当归中含阿魏酸的平均百分含量为0.060%，RSD为2.48%。
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3结论
建立高效液相色谱法测定当归药材中阿魏酸含量的方法，以乙腈-0.3%乙酸溶液(体积比为30∶70)为流动相，样品中各组分能达到完全分离，杂质对测定无干扰，检测结果符合药典规定。本方法简便准确、重现性好、分析时间短，可作为当归中阿魏酸含量测定的参考方法。试验中采用避光冷藏的方法保存阿魏酸对照品和当归提取液，未发现阿魏酸见光、遇热、放置含量下降显著的现象，与闵凡新等的报道相似。
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