磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。由于具有较广的抗菌谱，疗效确切、性质稳定、使用简便、价格便宜，便于长期保存等优点，磺胺类药物在我国水产养殖中应用较广。但由于磺胺类药物在体内的作用时间和代谢时间较长，如果食用磺胺类药物残留量较多的鱼肉，会对人体健康产生不良影响。
磺胺类药物种类可达数千种，其中应用较广并具有一定疗效的就有几十种。鱼肉中同时测定多种磺胺类药物残留的方法在我国鲜有报道，因此本文建立用高效液相色谱法同时测定鱼肉中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺喹恶啉、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪残留量的方法。
1实验部分
1.1仪器与试剂
日立L-2000系列高效液相色谱仪，紫外检测器。离心机，减压旋转蒸发仪。磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺喹恶啉、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪均为标准品，所用试剂除注明外均为分析纯。水均为超纯水，甲醇为色谱纯。
1.2色谱条件
色谱柱：AgilentZORBAxSB-C18(i.d.4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇-1%乙酸体系，梯度洗脱(见表1);流速：1.0mL/min;检测波长270nm;柱温40℃;进样量20μL。
1.3标准溶液的配制
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准确称取磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺喹恶啉、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪各0.00100g溶于10mL甲醇，配制成浓度均为100mg/L的标准储备液，再逐级用流动相稀释至所需的浓度，备用。
1.4样品的前处理
称取组织样品5g，加入乙睛25mL，无水硫酸钠少许，超声振荡30min，以3000r/min的速度离心5min。分离后的残渣再用25mL乙睛处理，振荡10min后，以3000r/min的速度离心5min。合并两次的上清液，加入正己烷30mL，振荡10min后，静置5min，取下层液体，加入正丙醇10mL，用旋转蒸发仪于50℃下蒸干，残留物用95%乙睛3.0mL溶解，过sep-Pak氧化铝柱。用95%乙睛5.0mL过柱，不收集，再用70%乙睛10mL洗脱后，洗脱液中加人5mL正丙醇，用旋转蒸发仪于50℃下蒸干，残留物用5.0mL流动相溶解，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。
2结果与讨论
2.1色谱条件的选择
2.1.1淋洗液的选择实验采用梯度淋洗，使用甲醇-1%乙酸、乙睛-1%乙酸两种淋洗体系，均能使13种磺胺类化合物分离，但考虑到乙睛的毒性大于甲醇，故选择甲醇-1%乙酸为淋洗液。2.1.2测定波长的选择综合考虑13种分析物的吸收光谱，选择最佳吸收波长为270nm。根据上述色谱条件，得标样和样品的HPLC色谱图（见图1）。由图1可知，13种磺胺类化合物分离较好，样品中检出的该类化合物峰保留时间与标样峰保留时间一致性高，说明该色谱条件可行。
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2.2线性范围和检出限
将100mg/L的混合标准储备液稀释成不同浓度的系列标准溶液，均取20μL进样，进行紫外检测得到一组色谱图，以峰面积对质量浓度作回归方程，得到良好的线性关系，且线性范围较宽。用0.01mg/L的标准溶液进样，根据仪器信噪比3倍测得最低检出限。用1.0mg/L的标准溶液进样检测，得到精密度(n=6)。测定结果(见表2)。
2.3回收率试验
准确称取5.149g鱼肉，加入13种磺胺类化合物混标，按照1.4鱼肉样品前处理所述方法，得到各化合物的回收率结果(见表3)。
2.4实际样品的测定
参照本方法对某农贸市场的5种鱼肉进行检测(见表4)。
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3结论
利用分光光度法测定高碘酸银（Ⅲ）盐浓度，具有简便、快速、干扰少、测定结果准确可靠的特点，有很好的应用价值。
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