引言
在食品中添加着色剂可以改善食品色泽，增加食欲。食品着色剂分为天然色素和人工合成色素两大类，其中人工合成色素具有成本低廉、色调多样、色泽鲜亮和着色力强等特点，在食品加工业中被广泛采用。人工合成色素是由煤焦油中的苯胺加工而成，属于偶氮类化合物。毒理学研究发现，某些合成色素有慢性毒性或致癌性，故各国都严格控制其使用范围和使用量。我国《食用添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定：食品中亮蓝、日落黄和苋菜红的最大使用限量为0.025g/kg，胭脂红和柠檬黄为0.05g/kg。
目前，人工合成色素检测方法有示波极谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法等，以上方法存在样品前处理复杂，定性、定量不够准确的问题。毛细管电泳法作为一种快速、高效的分离手段，在此领域的报道较少。HuiweiLiu等利用毛细管电泳法将5种人工合成色素分离，但没有进行实际样品测定。本文建立毛细管电泳法测定糖果中5种人工合成色素的方法，该法前处理过程简单、测定结果准确、灵敏。
1实验部分
1.1仪器和试剂
P/ACETMMDQ毛细管电泳仪，二极管阵列紫外检测器，Karat8.0系统软件，未涂层石英毛细管75μmID×50/57cm(分离长度/总长)(美国Beckman公司)，PHS-3CW型pH计(上海理达仪器厂)。柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红和亮蓝(中国计量科学研究院GBW(E)100001a~5a)。糖果购自市场。实验用水为超纯水(美国Millipore公司)，缓冲溶液和样品都用0.45μm滤膜过滤处理。
1.2操作步骤
引言
在食品中添加着色剂可以改善食品色泽，增加食欲。食品着色剂分为天然色素和人工合成色素两大类，其中人工合成色素具有成本低廉、色调多样、色泽鲜亮和着色力强等特点，在食品加工业中被广泛采用。人工合成色素是由煤焦油中的苯胺加工而成，属于偶氮类化合物。毒理学研究发现，某些合成色素有慢性毒性或致癌性，故各国都严格控制其使用范围和使用量。我国《食用添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定：食品中亮蓝、日落黄和苋菜红的最大使用限量为0.025g/kg，胭脂红和柠檬黄为0.05g/kg。
目前，人工合成色素检测方法有示波极谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法等，以上方法存在样品前处理复杂，定性、定量不够准确的问题。毛细管电泳法作为一种快速、高效的分离手段，在此领域的报道较少。HuiweiLiu等利用毛细管电泳法将5种人工合成色素分离，但没有进行实际样品测定。本文建立毛细管电泳法测定糖果中5种人工合成色素的方法，该法前处理过程简单、测定结果准确、灵敏。
1实验部分
1.1仪器和试剂
P/ACETMMDQ毛细管电泳仪，二极管阵列紫外检测器，Karat8.0系统软件，未涂层石英毛细管75μmID×50/57cm(分离长度/总长)(美国Beckman公司)，PHS-3CW型pH计(上海理达仪器厂)。柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红和亮蓝(中国计量科学研究院GBW(E)100001a~5a)。糖果购自市场。实验用水为超纯水(美国Millipore公司)，缓冲溶液和样品都用0.45μm滤膜过滤处理。
1.2操作步骤
电泳条件：运行电压25kV，实验温度25℃，压力进样0.5psi，进样时间5s，检测波长220nm;缓冲溶液：20mmol/L硼砂，用0.1mol/LH3PO4和0.1mol/LNaOH调节pH。
毛细管在每次运行前分别用0.1mol/LNaOH、水和缓冲溶液冲洗3min，平衡10min;间隔进样时，用缓冲溶液冲洗5min，平衡15min。
准确移取柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红和亮蓝，超纯水定容，摇匀，常温保存，备用。
1.3溶液配置
标准品溶液分别移取0.5mg/mL柠檬黄、日落黄和亮蓝色素标准品1mL，苋菜红、胭脂红标准品200μL,超纯水定容至10mL，配置成标准储备液，4℃冷藏保存。
样品处理分别从购买的5袋糖果中，各选取1块，研磨，混匀。精确量取0.1000g样品，放入50mL锥形瓶中，加入20mL超纯水，称重。室温超声20min，称重后补足质量。过0.45μm滤膜后上机测定。
2结果与讨论
2.1缓冲液种类对分离的影响
5种人工合成色素分子结构中均含有磺酸基(见图1)。这些分子可以在一定条件下电离成带有一个或者多个负电荷的粒子，产生电泳行为。实验选取磷酸盐体系、NaAc-HAc和硼砂体系。实验结果表明：5种人工合成色素在硼砂体系中可以实现完全分离。
2.2缓冲液pH对分离的影响毛细管的电渗流(EOF)对于pH的改变很敏感，且pH变化，亦可引起分离度以及峰形等参数的改变。较高pH的硼砂缓冲溶液不仅可以增加5种人工合成色素分子中含羟基组分的溶解度，同时可以增大EOF，提高分离速度;但EOF的加快会导致迁移时间缩短，各组分不能完全分离。本实验考察硼砂缓冲溶液pH在8.00~10.25范围内对迁移时间的影响(见图2)。实验结果表明：当pH>9.40时，苋菜红和胭脂红两种同分异构体不能分离;而pH9.00时，5种人工合成色素可以实现基线分离，且分离度和峰形等参数令人满意。
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2.3缓冲液浓度对分离的影响
在恒定条件下，增加缓冲液的浓度，可以增加分离速度，但浓度太高会产生焦耳热。本实验在硼砂缓冲溶液，pH9.00，25kV分离电压条件下，分别考察4种不同浓度对5种人工合成色素分离情况的影响。实验结果表明：随着缓冲溶液浓度的增大，分离时间缩短。其分离情况(见图3)。硼砂缓冲溶液为20mmol/L时，5种人工合成色素可以实现基线分离，且产生的焦耳热较小。
2.4电压对分离的影响
分离电压升高，分离时间变短，产生的焦耳热增多，引起区带展宽，谱峰的基线过高且部分峰重叠;电压过低，则分离时间较长，且分离不完全。本实验分离电压和电流的欧姆曲线表示当电压高于27kV时，欧姆曲线偏离线性，实验选用25kV的运行电压(见图4)。
2.5系统稳定性考察
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在20mmol/L硼砂缓冲溶液，pH9.00，25kV分离电压，220nm检测波长的色谱条件下，5种人工合成色素迁移时间的RSD%日内(n=6)小于1%，日间小于3%(n=5);峰面积的RSD%日内(n=6)小于3%，日间小于3.6%(n=5)。
2.6标准曲线及加标回收
分别准确移取柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红和亮蓝对照品溶液，置于5mL容量瓶中，超纯水定容，摇匀，进行分析。各组分峰面积分别对其浓度做图得到标准曲线(见表1)。2.5和2.6的实验结果表明：此方法可以用于实际样品分析。
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2.7样品分析及结果
用本法分别对此样品进行分析，平行测定5次。采用标准加入法，确定样品峰;采用标准曲线法测定其含量。在最佳分离条件下5种人工合成色素能够得到较好的分离，标准品和样品色谱图(见图5)。样品测定结果(见表2)。
3小结
本次购买的市售糖果中检出苋菜红、胭脂红和
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柠檬黄3种色素，但是色素含量均在《食用添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定范围内。与传统的液相色谱法相比，本方法不用酸化处理样品，简化前处理程序，节省时间，且本方法的灵敏度和液相法一致，检出限可达到10¯6。
此方法还可以用在饮料、啤酒以及色素品质的检测中，此部分实验正在进行。
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