盐酸非索非那定是以特非那定的活性代谢产物——非索非那定的盐酸盐的形式存在的。特非那定不仅本身有药理作用，其代谢产物仍具有药理活性，如直接用其治疗过敏反应，可免受药酶代谢而消除对人体的心脏毒性。基于此点，从1995年开始全面研究特非那定的活性代谢产物——非索非那定(Fexofenadine;AllegraTM,MDL16455)，作为新型抗组胺药，其以盐酸盐的形式存在。
1实验材料
甲醇和乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。盐酸非索非那定样品由本院合成室提供。
2仪器及色谱条件
仪器：RAINIDYNAMAXMODELSD-200泵;RAINIDYNAMAX紫外检测器;色谱柱：ODS柱(DiamasilC18,5μm,4.6m×200mm);流动相：0.01mol/LKH2PO4(pH3.5)-甲醇(40∶60);流速：1.0mL/min;柱温：40℃;检测波长：220nm;检测灵敏度：0.1AUFS;理论板数按盐酸非索非那定峰计算应不低于5000。
3实验方法与结果
3.1方法研究
3.1.1流动相的选择用盐酸非索非那定和中间体进行流动相的选择和优化。我们采用ODSC18柱为分离柱，考察甲醇-磷酸盐溶液、乙腈-磷酸盐溶液和甲醇-乙腈-磷酸盐流动相系统。试验结果表明，选用甲醇-磷酸盐系统为好。为使杂质峰和盐酸非索非那定峰分开，调整盐的浓度，有机相与水相的比例以及流动相的pH值，对流动相进一步优化，最后确定为：0.01mol/L的KH2PO4(pH3.5)-甲醇（40∶60）为流动相。
3.1.2盐酸非索非那定和中间体的分离考察分别取盐酸非索非那定和中间体I、中间体II适量，混合均匀，再取混合物适量，在选定的色谱条件下进行试验，结果表明：在此色谱条件下，盐酸非索非那定与二种中间体能很好地分离。HPLC色谱图（见图1）。
[attach]50781[/attach]
3.1.3盐酸非索非那定酸碱破坏性试验取盐酸非索非那定20mg，分别加入0.01mol/L的盐酸溶液和1mol/L的氢氧化钠溶液20mL，置沸水浴中回馏2h，放冷；分别用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调pH至中性，进样测定，试验结果表明：本品经酸碱加热破坏，产生新的杂质峰，在此色谱条件下能与盐酸非索非那定主成分色谱峰分开。HPLC色谱图（见图2）。
[attach]50782[/attach]
3.1.4检测限试验取盐酸非索非那定、中间体I和中间体II适量，加流动相稀释成低浓度，进样测定，记录色谱图。试验结果：盐酸非索非那定最小检测浓度为0.1μg/mL，中间体I最小检测浓度为0.2μg/mL，，中间体II最小检测浓度为0.2μg/mL。3.1.5线性关系试验量取供试品溶液(0.4mg/mL)5.0mL,置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。再分别量取此液0.5mL，1.0mL，2.0mL，4.0mL，8.0mL，加流动相稀释至10mL，摇匀，得1μg/mL，2μg/mL，4μg/mL，8μg/mL，16μg/mL的样品溶液，分别进样20μL，测定峰面积，作C-A线性方程如下：
回归方程A=563.6+4504.7C
相关系数r=0.9999
试验结果表明：在220nm波长处盐酸非索非
那定在1~8μ/mL范围内，峰面积A与浓度C线性关系良好。
3.1.6重现性试验取010813批样品溶液20mL，注入液相色谱仪，连续进样6次，依法进行有关物质检查。试验结果表明：有关物质为0.17%，RSD为1.5%(n=6)。
3.1.7样品溶液稳定性试验取010813批样品溶液，分别在放置0h、4h、8h、24h进行测定。试验结果表明：盐酸非索非那定溶液在24h内基本稳定。
3.2三批样品、对照品有关物质测定准确称取KH2PO41.36g，溶解于950mL水中。用稀磷酸(1→5)调pH3.5，加水稀释至1000mL，混匀，滤过，即得0.01mol/L磷酸二氢钾溶液。取上述溶液600mL，甲醇400mL，混匀，脱气，即得0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(pH3.5)-甲醇(40∶60)的流动相。
精密称取供试品10mg，置25mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0mL,置100mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照溶液。试验结果(见表1)。1%对照溶液和供试品溶液HPLC色谱图(见图3)。
[attach]50783[/attach]
4讨论
流动相中缓冲盐浓度及pH的确定：为使杂质峰和盐酸非索非那定峰分开，调整盐的浓度，以及流动相的pH值，对流动相进一步优化，最后确定为：0.01mol/L的KH2PO4(pH3.5)-甲醇(40∶60)为流动相。
来源：《现代仪器》，转载请注明出处-仪器信息网(www.cncal.com）