FCM(flowcytometry)即流式细胞术，是用流式细胞仪(flowcytometerFCM)测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。流式细胞仪主要由四部分组成：液流系统、光学系统、电子系统、分析系统。一般是将待测细胞或微粒进行荧光染色后制成悬液标本，在一定气体压力下将待测样品压入流动室，用不含细胞或微粒的缓冲液(又称鞘液)在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测细胞或微粒流成一定角度，使鞘液包绕着细胞或微粒高速流动，形成一个圆形的流束(即鞘流)，待测细胞在鞘液的包裹下单行排列，依次通过流式细胞仪的检测区域，经激发光激发后产生荧光信号并由微机进行分析。
现代流式细胞术更是由于它结合单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学技术，使其在生物学、临床医学、药物学、材料学等众多研究领域中的应用有更加突飞猛进的发展。在生物学中应用流式细胞术可进行细胞核型分析、染色体分析、分选指定的染色体或细胞，有时也用来检测或定量测量细胞表面或内部特异基因所编码的细胞分子。在医学中利用FCM可进行细胞周期分析、DNA倍体分析、定量分析检测细胞增殖标志物、细胞表面标志、癌基因蛋白产物、耐药蛋白、细胞凋亡等，为疾病的诊断与治疗提供可靠信息。
横纹肌肉瘤是儿童和青年最常见的软组织肉瘤，在儿童发病率最高，青春期后期发病率最低，5%的横纹肌肉瘤发生于儿童，2%为先天性。在成人，尤其是大于40岁的人群中，横纹肌肉瘤很少见。本组研究以20年来的病理资料存档完整的90例横纹肌肉瘤石蜡标本为研究对象，研究横纹肌肉瘤细胞的细胞周期和DNA倍体变化与临床病理分型之间的关系。荧光染料使用碘化丙啶(PI)，PI可以和DNA双链结合，细胞中PI染料的含量与DNA的含量成正比，因此PI的含量就间接反映出细胞中DNA的含量和周期分布情况。
1材料与方法
1.1标本
本研究所用90例病例均为本院存档的病理蜡块标本，相关病理资料详实。其中男性55例，女性35例，男女比例为1.57∶1。年龄2~76岁，平均年龄33.9岁。病理类型：胚胎型30例、腺泡型38例、多形性22例。组织学分级：Ⅰ级23例、Ⅱ级44例、Ⅲ级23例。转移情况：原位复发42例、淋巴结转移6例、远处转移18例、死亡42例。另选正常淋巴结组织蜡块3例作为标准对照。
1.2仪器与试剂
流式细胞仪为美国BECKMANCOULTER公司生产，型号EPICS-XL。数据采集软件为SYSTEMII,数据分析软件采用MULTICYCLE。组织切片机为德国莱卡公司产品2502型。其他设备为常用的冰箱、离心机、恒温箱、电子天平等。
1.3主要试剂
二甲苯、无水乙醇、生理盐水、1N盐酸、0.5%胃蛋白酶、含RNA酶的碘化丙啶染料。
1.4方法步骤
制备样本单细胞悬液。
复合HE切片，按切片选出相应存档蜡块，石蜡包埋组织不得小于10×10×2mm，在组织切片机上连续切取3~5片50μm厚切片，置于试管内。将盛有组织切片的试管置于60℃恒温箱中预热30min，取出后趁热加入足量二甲苯，30min后更换二甲苯，重复3次。
彻底脱蜡后，分别用无水乙醇×2、95%、80%、70%的梯度酒精漂洗组织切片，直至返水。生理盐水冲洗组织切片2~3次，将组织切片置于平皿中，加入1mL生理盐水，用弯头眼科剪剪碎组织。
用1N盐酸溶液配制0.5%pH1.5的胃蛋白酶消化液。
将剪碎的组织悬液从平皿中移入离心管中，1200rpm离心5min，弃上清。
向离心管中加入2mL胃蛋白酶消化液，在37℃恒温孵箱孵育1h。
将消化好的组织1200rpm离心5min，弃上清，加入1mL生理盐水重悬终止消化。
用200目尼龙网过滤样本，滤液移入流式细胞仪专用上样管中，800rpm离心5min，弃上清，加入PI染料1mL，室温避光孵育30min，上机检测。
1.5检测分析方法
1.5.1标本检测在SYSTEMII操作系统下，首先检测正常淋巴细胞，调整电压将G0/1期细胞峰定位于直方图横坐标荧光强度为200的位置，液流速度设为低速，然后再检测肿瘤标本。
1.5.2分析方法DNA倍体，通过计算DNA指数(DI)进行分析：
DI=肿瘤标本G0/1峰平均荧光强度/正常标本
G0/1峰平均荧光强度
二倍体：DI=1.0(0.9~1.1)
四倍体：DI=1.9~2.1
非整倍体：DI1.1
偏移正常二倍体5%的峰应考虑为异倍体
S期比率
利用SPSS10.0统计软件包进行统计分析。
2结果
2.1不同DNA倍体的分布本组研究将DNA倍体分为次二倍体组(DI1.1)和近四倍体组(DI在1.8~2.5之间)三组，同时出现多周期细胞群。
其中二倍体8例（8/908.89%），次二倍体4例（4/904.44%），超二倍体38例（38/9042.22%），近四倍体13例（13/9014.44%），出现多周期细胞群27例（27/9030%）（见图1）。根据检测的情况，本组研究将S期细胞百分率（SPF）不同的病例分为4组，第一组：SPF为0（6例6.67%），0