荧光分析的特点及应用
仪器网 · 2012-07-15 08:58 · 31984 次点击
一、荧光分析的特点
1.灵敏度高
荧光分析的最大特点是灵敏度高。一般说来.荧光分析的灵敏度要比分光光度法高2-4个数量级,它测定的下限在0.1x10-6了一0.001x10-6护之间。
2.选择性强
荧光光谱包括激发光谱和发射光谱。所以荧光法既能根据特征发射,又能根据特征吸枚来鉴定物质。假如某几种物质的发射光谱相似,可以从激发光谱的差异把它们区分开来;如果它们的吸收光潜相同,则可从发射光谱来区别。荧光法与只能得到待测物质的特征吸收光谱的分光光度法相比,在鉴定物质时,选择性更强。
3.试样量少和方法简单
由于荧光分析法灵敏度高,所以测定用的试样量可减少,特别在使用微量池时,用量可大大减少。
4.提供比较多的物理参数
荧光分析方法能提供包括激发光谱和发射光i普以及荧光强度、荧光效率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数。这些参数反映了分子的各种特性,并且通过它们可以得到被研究分子的更多的信息,这也是分光光度法不能相比的地方。
二、荧光分析的应用
1.无机物分析
无机离子中除少数外一般不发荧光。但很多无机离子(主要是阳离子)能与一些有机试剂形成荧光配合物,而进行定量测定。目前以形成荧光配合物方式可以测定的元素已达60余种,其中较常采用荧光分析进行测定的元素有Be,Al,B,Ga,Se,Mg及某些稀土元素。还有一些阴离子如氛、佩离子等能使其他物质的荧光减弱,据此可测定氛和氛等离子的浓度。
2.生物化学及生理医学方面的应用
荧光法对于生物中重要的许多化合物具有很高的灵敏度和较好的特效性.所以广泛用于生物化学分析、生理医学研究和临床分析,例如:荧光法不仅能侧定微量氨基酸和蛋白质.
还能研究蛋白质结构。将蛋白质与一些荧光染料结合产生发荧光的蛋白质衍生物,而使蛋白质分子的荧光强度发生改变,激发和发射光谱产生位移,荧光偏振也可能发生变化。根据这些参数的变化,就可以推测蛋白质分子的物理化学特性和构象的变化等。它也是进行定性和定量分析酶以及研究酶动力学和机理的有用工具。在医学研究方面,荧光技术能提供关于细胞新陈代谢的重要信息。
3.药物分析
为了分析低浓度的各种药物,需要非常灵敏的分析方法,很多情况下荧光法是十分有效的。例如肾上腺素、青霉素、苯巴比妥、普鲁卡因和利血平、维生素等的测定。
目前还采用荧光分光光度计作为高效液相色谱、薄层色谱的检测器,使有效的分离手段与高灵敏度、高选择性的测定方法结合起来,可用于测定复杂的混合物。
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