石蜡切片与冰冻切片
仪器网 · 2012-07-16 13:40 · 38410 次点击
一、组织和细胞标本类型:
(一)组织标本类:
1、石蜡切片:组织形态保存好
2、冰冻切片:抗原性保存好
(二)细胞标本类:
1、组织印片2、细胞培养片(细胞爬片)3、细胞涂片
二、组织取材
1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。
2、组织取材注意事项:
(1)标本新鲜:组织要求离体后30min~2h内浸入固定液,尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。
(2)注意防止人为因素的影响刀和剪要快,避免挤压。
(3)组织块的大小厚为0.1~0.3cm,大小可根据需要而定。
三、活细胞标本的制备法
(1)细胞大量培养后,经消化将细胞制成悬液(106)涂在涂有切片粘合剂的载玻片上,凉干后固定。
(2)将细胞直接培养在盖玻片上。
(3)将细胞直接培养在6孔或9孔板上,经固定后可行IHC。
四、石蜡切片的制备
1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂,只溶解在二甲苯类试剂中。因而,组织经固定和水洗后含大量水分,需用乙醇类试剂进行脱水,水脱完后,组织内含有大量的乙醇,还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换,最后经浸蜡,组织细胞内被大量石蜡支称,才使组织能用于石蜡切片。
2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间
75%乙醇30min,85%乙醇30min,95%乙醇Ⅰ1h,Ⅱ1h,Ⅲ过夜或2h;无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min;二甲苯Ⅰ15min,Ⅱ10min,Ⅲ10min;石蜡Ⅰ30min,石蜡Ⅱ30min,石蜡Ⅲ1~2h。
五、冰冻切片的保存和使用
1、冰冻切片固定后-80℃保存备用
2、冰冻切片从-80℃取出,凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。