石蜡切片与其他技术方法的结合

  仪器网 ·  2012-07-16 13:40  ·  41921 次点击
石蜡切片虽然是经典的方法,但又是最基本的方法,它与其他新的技术方法相结合,使传统的老技术扩大了其应用范围,开辟了许多新领域,增加了许多新的研究、观察内容。随新的仪器及新的研究技术的不断问世及使用,使组织学的观察研究从简单的形态结构深入到各种成分的定性观察,又从定性转向定量计测,使细胞组织的形态,功能及代谢三结合,从而达到定性可靠、定位准确及定量可测。
与免疫学技术结合组织制片技术与免疫学技术结合构成免疫组织(细胞)化学技术,利用抗原与抗体的特异性结合原理,检测组织切片中细胞组织的多肽及蛋白质等大分子物质的定性和定位观察研究。不论哪种免疫组织化学技术都包括抗体的制备、组织材料处理、制备玻片标本以及免疫染色。冰冻切片手续简便,制片过程中抗原活性丢失少,但组织细胞形态较差;石蜡切片步骤繁多,制片中抗原活性有所减低,但组织细胞形态清晰,是免疫组织化学常规制备切片方法之一。一般石蜡包埋的组织切片用于检测胞浆或核内的抗原,不宜做表面抗原染色,有人将新鲜组织浸泡于冷磷酸缓冲液内小时,再固定于%乙醇或其他固定液固定的组织切片,可用于表面抗原染色。乙醇、丙酮等固定剂对抗原破坏较轻,但结构保存较差。最常用的固定液有中性和缓冲福尔马林,它可与蛋白质交叉结合封闭抗原,在进行免疫染色前,切片再用蛋白酶消化,以暴露抗原部位、增强抗原的反应。在石蜡切片上进行的常用的免疫组化染色有免疫酶组织化学技术中的PAP法(非标记过氧化物酶-抗过氧化物酶法)及亲和免疫组织化学技术中的ABC法(抗生物素-生物素-过氧化物酶复合物技术),其特异性强、敏感性高。使用两种染色法的组织切片都需先经第一抗体(各种抗血清)孵育;再经第二抗体或生物素标记的第二抗体孵育;后经PAP复和物或ABC复合物孵育,最后以DAB(二氨基联苯胺)-HO液显色呈棕黄色沉淀。常规复染、脱水、透明、封片成永久性玻片标本,光镜下检测常规或特殊染色法难以显示的成分及其精确定位,可用于基础研究及临床病理研究及诊断。微波用于石蜡包埋切片免疫组织化学染色既简化步骤又节省时间,且能促进免疫染色效果。
石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析是石蜡包埋组织切片与流式细胞术(flowcytometry,FCM)结合使用来测量DNA含量及倍体分析,这一结合是流式细胞仪在临床应用中,特别是在肿瘤研究方面开拓了新的研究途径。FCM是激光、电子和电子计算机、流体喷射技术的综合发展应用,是快速定量分析细胞的技术,要求被检细胞呈悬浮状态。目前已可测量细胞的大小、体积、DNA含量、DNA合成速率、RNA含量、表面抗原、染色体等。由于制备样品技术的原因,过去许多流式分析资料仅限于采用新鲜组织标本,Hedley等年首先报导了FCM分析石蜡包埋组织切片制备分散细胞悬液技术来进行DNA含量的检测,从组织切片中能获得足够数量的单个细胞,且与新鲜组织分离获得的单个细胞在形态及DNA含量组方图上均极为相似。目前国内也在逐步开展这方面的研究。由于这种方法取材可在病理组织观察或诊断基础上进行,比活检或手术切除标本更为准确,又可做回顾性研究分析;且对DNA检测速度快、数据客观可靠,在肿瘤诊断、预后的预测和治疗反应上具有重要价值;利用过去的标本可成批制作细胞悬液、成批上机测试,避免了仪器调试状态不同带来的影响,石蜡包埋块保存时间的长短对结果影响不大。

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