本法用甲醇-水为流动相，在C18反相柱上建立了陆英中具有乌索酸含量测定的高效液相色谱法，以95%乙醇为溶剂处理样品具有提取率高、色谱干扰小、物质分离效果好的优点，本法简便易行、快速准确，其最小检出限为0.2ug。不同浓度水平检测结果日间、日内相对误差小于4.0%。
关键词：陆英草乌索酸高效液相色谱含量测定
AnalysisofUrsolicAcidinHerbaSambuciChinensisusingHplc
ThepaperreportedthedeterminationofUrsolicAcidinHerbaSambuciChinensisusingHplc,theseparationwasachievedbyapplyinganWaters-ODS150×4.6mm(5um)columnandmethanol-water(90:10)asmobilephaseatflowrateof0.8ml/min.theUVdetectorwassetat210nmExternalstandardmethodwasapplied.Thelinearrangewas150-2000ug/mlwiththelowerlimitofdetectionof0.2ug.Itwasfoundtobeeffielentandlowinterferencetoextractthesampleswithether.
陆英(HerbaSambuciChinensis)系为忍冬科接骨木属植物，生于山坡、路旁、溪边、荒野灌丛中。产于长江以南地区。据报道陆英草含氯原酸、α-香树脂素棕榈酸酯(α-amyinpalmitate)、乌索酸、β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇、硝酸钾、黄酮、鞣质等。目前其它中药材乌索酸含量的测定多采用比色法及薄层扫描以及衍生化法气相色谱检测，其操作繁琐，显色及前处理误差大，费事费力。
本文采用高效液相色谱法用甲醇-水为流动相，检测波长210nm，在C18反相色谱柱上建立了其含量的测定方法，具有简便可行、准确、快速、物质分离效果好的优点，重现性好，适应范围广，利于对陆英草的准确、深入研究。
实验部分
一、仪器设备及试剂
Waters600EHplc系统，UV-2487可变波长检测器，20ul定量环，M32数据处理工作站。
乌索酸对照品：中国医学科学院药物研究所95%乙醇(AR)甲醇(AR)水
二、实验方法
1、色谱条件色谱柱:Waters-ODS150×4.6mm(5um);
流动相：甲醇-水(90：10);流速：0.8ml/min
UV波长：210nm;量程：0.005AUFS;温度：25℃
数据处理：峰面积外标定量。
2、样品处理
(1)将原料(樟树医药公司)的叶粉碎过筛并恒重。
(2)称取样品10克，置索氏提取器中，加95%乙醇回流提取8小时，提取液浓缩定容于100毫升的容量瓶中，取上清液约5毫升过针式过滤器过滤，取滤液待测。
3、标准曲线的确定
分别吸取配好的5.0mg/ml乌索酸标准液0.4、0.8、1.6、2.8、3.6ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释成0.2、0.4、0.8、1.4、1.8mg/ml系列标准溶液，在选定的色谱条件下，重复进3次每次20ul,以标准品峰面积与浓度关系得出回归方程：
Y=3.35E005X8.74E003R=0.9999
4、样品测定
将预处理好的待测样品液进样20ul检测，通过软件操作的得出浓度值。
三、结果
1、乌索酸对照品与陆英样品的色谱图1
图1图2
2、方法重现性用两个浓度水平进行连续和间隔时间及连续3天测定，考察方法重现性。结果：其最大相对标准偏差小于4.0%。
2、加标回收率吸取5.0mg/ml乌索酸标准液0.8、1.6、3.6各三份，分别加入原料样品10克，按前法操作，测定结果，计算回收率结果为99.9%-100.8%，平均100.4%，RSD为1.0%。
讨论
1、迷迭香中的乌索酸是非极性五环三萜类酸，在C18反相柱上有较大的保留值，以甲醇和水二元体系作为流动相，甲醇浓度与极性相近共存物质的分离及峰形有显著影响，本法选定比例是考虑实际样品组分分离确定的，对于其它品种样品可作适当的调整。
2、检测波长我们进行了波长扫描，乌索酸在205nm处有最大吸收峰，本法采用210nm，恒流比流动相洗脱对检测无影响。
3、本法检测出陆英草中平均含0.28%的乌索酸。
4、本法简便、易行，准确快速。