1仪器与设备
Agilent1100型高效液相色谱仪：由化学工作站、G1321A荧光检测器、G1311A四元泵、G1379A在线脱气机组成;色谱柱：LichrospherCl8柱(250rnm×4.6llllTl，5/an)，C18预柱(10mmx4.6mm，5胛，江苏舜星科技有限公司);TGL-16G高速台式离心机;SK.1型快速混匀器;AG-204型电子分析天平。
2方法与结果
2.1药液配制l3J
取羟基喜树碱和喜树碱标准品适量，精密称定，溶于0.01mol/L枸橼酸乙腈(1：1，v/v)中制得标准溶液。
2色谱条件
Agilentl100HPLC.荧光分析系统;荧光检测器Ex波长363nm、Em波长550nm;LichrospherCl8柱;柱温30cc;流动相：乙腈.0.075mol/L醋酸铵缓冲液(pH6.4)(32：68，含0.2%三乙胺);流速：1.0m~min;进样量：20吐。2.3血浆样品处理取血浆200L，加入l0稀醋酸，混匀，4℃避光放置24h，再加入内标(6~g/mL喜树碱标准液)l0和冷(一20℃)乙腈200。涡旋混匀30s，超声振荡3min，15000r/min离心10min，取上清液20吐进样。
3方法专属性
取兔空白血浆，除不加内标溶液外，其余按“样品处理”项下方法处理并分析，获得空白样品的色谱图;将一定浓度的羟基喜树碱标准溶液和内标溶液加入兔空白血浆中，同法操作，获得相应的色谱图;同法得到给药后血浆样品色谱图。结果表明血浆中的内源性物质不干扰HCPT和CPT的测定，具有明显的专属性。HCPT和CPT的保留时间分别为4.0min和8.6min。
4讨论
羟基喜树碱含一内酯结构，由于羟基喜树碱不溶于水，因此在注射剂的制备工艺中须用氢氧化钠碱化使羟基喜树碱内酯环开环成钠盐后溶于水。羟基喜树碱给药后在体内以内酯和钠盐两种形式存在，所以在测定血药浓度时需加入适量稀醋酸室温避光放置一段时间以使样品中钠盐形式的羟基喜树碱全部转化为和对照品一样的内酯形式。我们在研究中发现，在血浆中内酯形式仅占总量的10%左右【，因此酸化时间长，且酸化时间与药物浓度成正比。我们曾试用酸性更强的稀盐酸酸化，结果发现虽然可以大大缩短酸化时间，但是对色谱柱的损伤较大，因此最后仍采用稀醋酸酸化。