关于小麦粉中过氧化苯甲酰，舜星公司工程师用气相色谱仪进行分析实验，实验步骤及结果如下：
气相色谱法是将样品经过有机溶剂(如乙醚、石油醚、乙醚2石油醚混合溶剂、丙酮等)萃取,加入适当的还原剂(如铁粉、抗坏血酸、碘化钾、维生素C等)或在酸性条件下(如冰乙酸)将过氧化苯甲酰还原为苯甲酸,选择合适的气相色谱条件,用气相色谱仪测定,并与系列标准(苯甲酸或过氧化苯甲酰)比较定量。由于填充柱气相色谱法分离效果不佳,溶剂峰及样品峰拖尾严重,导致分析结果重现性差、误差大,且分析时间太长,所以现在都选择毛细管气相色谱法,如白晓朝、李金昶等用毛细管气相色谱法测定了面粉中过氧化苯甲酰的含量,检出限达1.0ng。但总的来说,气相色谱法存在一定缺陷,如样品处理操作较繁琐,需反复进行提取浓缩,溶剂消耗量较大。以下为改进版毛细管气相色谱法的详细内容：
1.1色谱条件
色谱柱:OV-1701大口径石英毛细管柱(30m×0.53mmi.d.);升温程序:130℃保持8min,然后以30℃/min升温至220℃并保持10min;汽化室温度:230℃;检测室温度:230℃;载气:N2,流速为20mL/min;燃气:H2,流速为20mL/min;助燃气:空气,流速为200mL/min;尾吹气流速:16mL/min。
1.2样品的提取与净化
样品的提取和净化按国标GB/T18415-2001中气相色谱法Ⅰ中第6.2款“样品的前处理”操作。
1.3测定
(1)色谱柱老化
色谱柱于220℃保持2～4h。
(2)系列标准工作溶液的制备
准确吸取苯甲酸标准使用液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,置于100mL具塞三角瓶中,除不加还原铁粉外,其余操作同国标GB/T18415-2001中气相色谱法Ⅰ中第6.2款“样品的前处理”。苯甲酸系列标准工作溶液的最终浓度分别为0、20、40、60、80、100μg/mL。
(3)分析
开启气相色谱仪,按1.2设定色谱条件,当仪器达到设定温度并稳定后,分别打开燃气及空气阀并点火。以微量进样器分别取不同浓度的苯甲酸标准工作溶液及样品提取液1.0μL注入气相色谱仪进行测定。
(4)定性与定量方法
小麦粉中过氧化苯甲酰含量的测定,以色谱图保留时间定性、峰面积外标法定量,小麦粉样品中过氧化苯甲酰的含量X按式(1)计算:X=(c×5/m)×0.992(1)
2结果与讨论
2.1色谱条件的改进
2.1.1色谱柱的改进
将色谱柱由玻璃填充柱改为OV-1701大口径毛细管柱。OV-1701大口径毛细管柱是一种中极性色谱柱,其液膜厚度较大(0.53μm),有较大的柱容量,与填充柱接近。将该色谱柱接在填充柱进样口,采用不分流进样。只要及时更换衬管并经硅烷化处理即可。大口径毛细管柱的柱温比玻璃填充柱高,其最高使用温度可达260℃,柱效及分析精度高于填充柱。
2.1.2测定温度条件的改进
将检测室及汽化室温度由250℃改为230℃,柱温由180℃(恒温)改为程序升温(见1.2色谱条件)。柱温为130℃并保持8min,使样品依据沸点高低依次汽化进入色谱柱后,以30℃/min的升温速率程序升温至220℃并保持10min,保证高沸点的组分分离并完全流出色谱柱以免造成峰展宽,甚至滞留在色谱柱中造成柱污染。大口径毛细管柱程序升温性能好,在程序升温条件可保证苯甲酸于5min左右出峰。与玻璃填充柱相比,其分离速度快。
2.1.3进样量的改进
将进样量由2.0μL改进为1.0μL。不同的色谱柱,其要求的进样量不同。玻璃填充柱的柱容量大,进样量可为1～5μL,但由于填充柱分离效率有限,如增加进样量,被测组分的色谱峰会被掩盖在溶剂色谱峰中,出现溶剂效应。大口径毛细管柱的进样量一般为1.0μL,尽管进样量小于填充柱,但分离效果和测定结果的准确度高于填充柱,可满足试验要求。
2.3标准工作曲线和检出限
测定系列标准工作溶液,求得苯甲酸浓度c与峰面积A的线性回归方程为A=1055.3c-1192.6,r=0.9988,线性范围为0～100μg/mL。当信噪比为3时,求得本法的检出限为10μg/mL。
2.4精密度试验
对同一样品中的过氧化苯甲酰含量进行测定,测定结果列于表1。由表1可知,测定结果的相对标准偏差小于1.1%,表明本方法的精密度较高。
2.5回收试验
采用本法对小麦粉样品进行测定并分别加入不同量的过氧化苯甲酰标准使用液进行加标回收试验,结果列于表2。由表2可知,加标回收率为96.5%～101.0%,说明本方法的准确度较高。
2.6比对试验
将本法与国标法进行比对试验,结果列于表3。由表3可知,本法与国标法相比,出峰时间提前约4min,样品分析时间缩短10min,检出限由20μg/mL降到10μg/mL,测定的相对标准偏差和加标回收率也有所提高。
通过改进国标法测定小麦粉中过氧化苯甲酰的色谱条件,大大缩短了检测时间,分离效果较好。该法简单易行,检测快速,灵敏度高,可以作为检测小麦粉中过氧化苯甲酰的较快速方法。