微生物检验质量控制在实验室计量
Tess · 2012-08-04 06:59 · 48677 次点击
认证中的应用
睢县疾病预防控制中心沈刚建实验室通过计量认证确保了所出具检验结果的公正、准确、可靠。从而达到其应有的法律效益。目前,实验室计量认证大部分项目偏重于卫生理化检验的质控措施,卫生微生物检验质控措施显的薄弱,缺乏一定的科学性。由于卫生微生物检验在食品安全检测占有重要位置,完善和健全微生物检验质控措施是非常必要的。为使其结果准确、可靠,有指标证明检出的结果是被检物客观实际,我们就日常工作中发现的问题,按照计量认证的要求,针对性的进行了一系列质量控制,通过实践认为行之有效,现总结报告如下:
内容与方法
1.一般质控措施:卫生细菌检验要求容量器皿准确、洁净、无菌,培养基、稀释液质量可靠,为此我们从以下几个方面进行了质量控制:1.1容量器皿的质控:(1)定量吸管:选择优等刻度吸管,进行校对合格后使用。(2)容量器皿的清洗:对所用刻度吸管、培养皿、烧瓶、试管等均以清水、洗衣粉洗净后,浸泡清洁液4h或夜,清水洗净馏水冲洗,不挂水珠为准。(3)容量器皿按常规包装,160℃干烘4h或15磅20min高压灭菌后,120℃烘干,于5天内使用。1.2配制培养基、稀释液的质控:(1)校正天平,准确称量,使用合格的离子交换水或蒸馏水;(2)使用脱水不变质的培养基;(3)使用合格的试剂原料,配制糖发酵液体培养基和稀释液;(4)用精密PH计调正PH,按定量分装试管或烧瓶,以适当温度和时间进行灭菌。1.3:无菌室无菌效果的质控:(1)无菌室门窗封闭程度合格;(2)定期进行紫外线灭菌效果检查,合格后使用;(培养基、稀释液、容量器皿等所需物品先置无菌室内再行灭菌;(4)进入无菌室要在缓冲间换无菌衣、帽、鞋,入无菌室工作未完时,不得再出入无菌室,标本从传递口进入。2.质量控制指标:卫生细菌检验质控指标系指随标本检验进行培养基、稀释液、容量器皿的无菌实验和标准菌株定量、定性生长试验。2.1无菌试验:(1)稀释液、吸管、盐水容器的无菌试验:将稀释液10毫升于灭菌容器内,混摇10次取1毫升于培养皿内,倾注45℃~50℃营养琼脂,37℃24h,应为无菌生长或培养基表面有菌生长,但不得超过5菌落为合格。(2)营养琼脂及培养皿的无菌试验:将融化冷至45℃~50℃的营养琼脂,倾注无菌培皿,,37℃24h,不得有菌生长。若琼脂内有菌生长为琼脂灭菌不严,若琼脂表面有菌生长为操作时无菌手续不严或无菌室灭菌不合格,若琼脂底部有菌生长,是培养皿不无菌。若琼脂表面菌落较少,可从平皿的菌落数中减去该菌落数乘以稀释倍数,即为被检样品的菌落数。(3)乳糖发酵管无菌试验:既将乳糖发酵管置37℃24h,无菌生长为合格。2.2标准菌株定量定性生长试验:(1)标准菌液制备:以标准大肠杆菌(ATCC25922河南省疾病预防控制中心提供)37℃16h肉汤培养物,稀释至每毫升含菌量235±6(10次测定S=2.747CV=0.017Sx=0.869)(2)取上述标准菌液1毫升于无菌培养皿内,倾入45℃~50℃营养琼脂混均,37℃24h,生长的菌落数应在235±6为合格。并取标准菌液1毫升于乳糖发酵管内37℃24h,以产酸气为大肠杆菌阳性,取乳糖发酵管阳性培养物划种EMB平板上37℃24h,大肠杆菌菌落应为黑色有金属光泽的菌落。2.3大肠菌群、细菌总数检验方法及标本采样、时间、方法、量、运送、保存、登记等均按卫生部《食品微生物检验方法)进行。
结果
每批标本同时进行上述质控指标的检测结果如下:1大肠菌群的测定:对30批标本随同上述各项质控指标的测定结果表明各项质控指标均合格,说明这30批标本的大肠菌群结果正确、可靠,是有客观质控指标证据的。2细菌总数的测定:对31批标本随同质控指标测定结果:30批质控合格,合格率96.77%,说明这30批结果是可靠的。一次质控指标不合格,查明原因为稀释液容量器灭菌不彻底所致。经从做得出了正确结果,避免了错误结果的报出。3无菌室紫外线灭菌效果:通过7次的观察,紫外线照射后每平皿菌落数均小于5,基本符合要求。但说明无菌室并非绝对无菌,只是比照射前减少,仍在质控范围内。
讨论与小结
微生物检验质量控制直接关系到细菌学诊断结果的准确性和可靠性,是卫生检测不可缺少的部分,在实验室计量认证中占有重要位置。有人认为每种微生物有各自的特点和繁殖条件,多是直观报读结果,很难定出客观质控指标。但我们根据微生物检验,要求检验用品可靠和操作技术准确的特点,采用一般实验室常规经济实用的方法进行了质控探讨,认为卫生细菌检验可以进行质量控制,而且完全可以满足计量认证的需要。不但可以进行一般质控措施外,也可定出明确的客观质控指标。既随同标本检验进行容量器皿、培养基、稀释液的无菌实验和标准菌株的定性、定量生长试验,作为微生物检验质控指标。这个指标可控制住检验所用器材的可靠性和操作技术的准确性。合格的质控指标检验结果,可证明标本检验结果是准确可靠的。若质控指标结果不合格或部分不合格,可根据不合格指示,及时找出原因,重做实验至质控指标合格为止,避免不正确结果的报出。从而使检验结果的准确性和可靠性有了科学依据,保证了实验室计量认证后所出具检验报告的严谨性和法律效益。特别适于有计划的、成批的或有争执的卫生细菌监测检定工作,实践证明行之有效。