核酸蛋白分析仪的原理

  仪器仪表网 ·  2012-08-16 09:12  ·  37618 次点击
DU640型核酸/蛋白分析仪由美国Backman公司生产,整体的系统设计是根据微聚焦光束技术确保能精确地测定至少5微升的样品,用于医学实验。配有强力而丰富的应用软件,具有高精确性、灵活性。波长范围:190--1100nm.基本功能:1.从标准曲线到蛋白浓度分析;2.核酸分析;3.DNA/RNA/寡核苷酸定量;4.DNA理论解链分析(Tm);5.标准动力学研究。
核酸蛋白分析仪原理基于被测组分和背景电解质的吸光度不同,当被检测组分通过检测窗时,吸光度发生变化服从朗伯-比尔定律,即在一定的实验条件下,吸光度与被测组分的浓度成正比。
核酸分析仪用于核酸蛋白检测
紫外-可见光分光光度计在生物科技中可用于测定核酸和蛋白质的浓度。
首先,核酸的基本结构单位是核苷酸。核苷酸由一个含氮碱基(嘌呤或嘧啶),一个戊糖(核糖或脱氧核糖)和一个或几个磷酸组成。由于核酸的碱基具有共轭双键,因而有紫外吸收的性质。各种碱基、核苷和核苷酸的吸收光谱略有区别。核酸的紫外吸收峰在260nm附近,可用于测定核酸。根据260nm与280nm的吸收光度(A260)可判断核酸纯度。
再谈蛋白质,构成它的组成是氨基酸,其中的种类包含酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸,这几种芳香族氨基酸的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。所以,紫外吸收法是280nm的光吸收法,含有核酸的蛋白质溶液使用280和260nm的吸收差法较好。蛋白质的稀溶液采用215与225nm的吸收差法。
此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。
还有一些测定蛋白质的方法,是通过蛋白质与一些物质的作用产生颜色,然后在此有色光光谱内测定吸光度。将已知浓度的蛋白质溶液稀释几个倍数,与物质作用后作为标准品,测定吸光度做出一条曲线,然后未知溶液的浓度就可通过吸光度来得出。这些方法包括,凯氏定氮法,考马斯亮蓝法(Bradford),Folin-酚试剂法(Lowry法)和BCA法。

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