菌落总数的测定——标准平板培养计数法--ATP荧光检测技术概念：菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或lml检样中所含细菌菌落的总数。食品卫生学意义：作为判定食品被污染程度的标志；预测食品存放的期限。国家标准采用标准平板培养计数法,所得结果只包括一群能在营养琼脂上生长繁殖的嗜中温性需氧菌的菌落总数。（一）设备和材料（二）培养基和试剂营养琼脂培养基：75％乙醇。生理盐水或其他稀释液：定量分装于玻璃瓶和试管内，灭菌。（三）检验程序菌落总数的检验程序如图所示。（四）操作步骤1、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨作成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r／min的速度处理1分钟，作成1:10的均匀稀释液。（2）用lml灭菌吸管吸取1:10稀释液lml，沿管壁徐徐注人含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，作成1:100的稀释液。
（3）另取lml灭菌吸管，按上项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支lml灭菌吸管。
（4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移lml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置46士l℃水浴保温）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有lml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）待琼脂凝固后，翻转平板，置36土1℃温箱内培养24士2小时（肉、水产、乳和蛋白为48士2小时）取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即使每克（或毫升）样品所含菌落总数。
2、菌落计数方法
作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。
3、菌落计数的报告
（1）平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
（2）稀释度的选择
a．应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见例1）。
b．若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字（见表例2及例3）。
c．若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例4）。
d．若所有稀释度的平均菌落数小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例5）。
e．若所有稀释度均无菌落生长,则以小于（﹤）1乘以最低稀释倍数报告之（见表例6）。
f．若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例7)。
（3）菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数据报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示