人脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒
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HumanBrainDerivedNeurotrophic
Facor(BDNF)ELISAKit
CatalogNo.CSB-E04501h
(96tests)
Thisimmunoassaykitallowsfortheinvitroquantitativedeterminationofhuman
BDNFconcentrationsinserum,plasmaandotherbiologicalfluids.
Expirationdatesixmonthsfromthedateofmanufacture
FORRESEARCHUSEONLY.NOTFORUSEINDIAGNOSTICPROCEDURES.
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INTRODUCTION
BDNFisa13kDa,119aminoacid(aa)residuenon-glycosylated
polypeptidewhoseprimarystructureisconservedamongallmammalian
speciesexamined.Initiallysynthesizedasa247aaresidueprepropeptide,
theBDNFmoleculeisdividedintoan18aaresiduesignalsequence,a110
aaresidueprosequence,anda119aaresiduematuresegment.Similarto
otherneurotrophicfactors,thereisapossibilitythattheN-terminusis
alternativelyspliced,givingrisetoalongerpre-prosegment(butidentical
maturesegment)withdifferentfunctionalproperties.Asamaturemolecule,
BDNFis52%identicaltoNGFattheaminoacidlevel,existsasa
noncovalently-linkedhomodimerinsolution,andcontainssixcysteine
residuesthatarebelievedtoformthreeintrachaindisulfidelinkages.BDNF
inplasmaisdetectedinthepg/mL
PRINCIPLEOFTHEASSAY
Themicrotiterplateprovidedinthiskithasbeenpre-coatedwithan
antibodyspecifictoBDNF.Standardsorsamplesarethenaddedtothe
appropriatemicrotiterplatewellswithaHorseradishPeroxidase(HRP)
-conjugatedantibodypreparationspecificforBDNFandincubated.Then
substratesolutionsareaddedtoeachwell.Theenzyme-substratereaction
isterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolor
changeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm±2
nm.TheconcentrationofBDNFinthesamplesisthendeterminedby
comparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.
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DETECTIONRANGE
0.62ng/ml-20ng/ml.Thestandardcurveconcentrationsusedforthe
ELISA’swere20ng/ml,10ng/ml,4.37ng/ml,1.87ng/ml,0.62ng/ml.
SPECIFICITY
ThisassayrecognizeshumanBDNF.Nosignificantcross-reactivityor
interferencewasobserved.
SENSITIVITY
TheminimumdetectabledoseofhumanBDNFistypicallylessthan0.31
ng/ml.
Thesensitivityofthisassay,orLowerLimitofDetection(LLD)wasdefined
asthelowestproteinconcentrationthatcouldbedifferentiatedfromzero.
MATERIALSPROVIDED
ReagentQuantity
Assayplate1
Standard5x0.5ml
HRP-conjugate1x6ml
SubstrateA1x7ml
SubstrateB1x7ml
StopSolution1x7ml
StandardS1S2S3S4S5
Concentration
0.621.874.371020
(ng/ml)
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STORAGE
1.Unopenedtestkitsshouldbestoredat2-8°Cuponreceiptandthe
microtiterplateshouldbekeptinasealedbag.Thetestkitmaybeused
throughouttheexpirationdateofthekit.Refertothepackagelabelfor
theexpirationdate.
2.Openedtestkitswillremainstableuntiltheexpiringdateshown,
provideditisstoredasprescribedabove.
3.Amicrotiterplatereaderwithabandwidthof10nmorlessandan
opticaldensityrangeof0-3ODorgreaterat450nmwavelengthis
acceptableforuseinabsorbancemeasurement.
OTHERSUPPLIESREQUIRED
Microplatereadercapableofmeasuringabsorbanceat450nm,with
thecorrectionwavelengthsetat540nmor570nm.
Pipettesandpipettetips.
Deionizedordistilledwater.
Squirtbottle,manifolddispenser,orautomatedmicroplatewasher.
SAMPLECOLLECTIONANDSTORAGE
SerumUseaserumseparatortube(SST)andallowsamplestoclot
for30minutesbeforecentrifugationfor15minutesat1000xg.Remove
serumandassayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat-20°C.
Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
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PlasmaCollectplasmausingcitrate,EDTA,orheparinasan
anticoagulant.Centrifugefor15minutesat1000xgwithin30minutes
ofcollection.Assayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat-20°C.
Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
Note:Grosslyhemolyzedsamplesarenotsuitableforuseinthisassay.
ASSAYPROCEDURE
Bringallreagentsandsamplestoroomtemperaturebeforeuse.Itis
recommendedthatallsamples,standards,andcontrolsbeassayedinduplicate.
1.SetaBlankwellwithoutanysolution.Add50μlofStandardorSample
perwell.
2.Add50μlofHRP-Conjugatetoeachwell(NottoBlank!).Incubatefor1
hourat37°C.
3.Aspirateeachwellandwash,repeatingtheprocessthreetimesfora
totalofthreewashes.WashbyfillingeachwellwithddHO(200μl)
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usingasquirtbottle,multi-channelpipette,manifolddispenseror
autowasher.Completeremovalofliquidateachstepisessentialto
goodperformance.Afterthelastwash,removeanyremainingWash
Bufferbyaspiratingordecanting.Inverttheplateandblotitagainst
cleanpapertowels.
4.Add50μlofSubstrateAand50μlSubstrateBtoeachwell.Incubate
for15minutesat37°C.Keepingtheplateawayfromdraftsandother
temperaturefluctuationsinthedark.
5.Add50μlofStopSolutiontoeachwell.Ifcolorchangedoesnot
appearuniform,gentlytaptheplatetoensurethoroughmixing.
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6.Determinetheopticaldensityofeachwellwithin30minutes,usinga
microplatereadersetto450nm.
CALCULATIONOFRESULTS
Averagetheduplicatereadingsforeachstandard,control,andsampleand
subtracttheaveragezerostandardopticaldensity.Createastandardcurve
byreducingthedatausingcomputersoftwarecapableofgeneratingafour
parameterlogistic(4-PL)curve-fit.Asanalternative,constructastandard
curvebyplottingthemeanabsorbanceforeachstandardonthey-axis
againsttheconcentrationonthex-axisanddrawabestfitcurvethroughthe
pointsonthegraph.Thedatamaybelinearizedbyplottingthelogofthe
BDNFconcentrationsversusthelogoftheO.D.andthebestfitlinecanbe
determinedbyregressionanalysis.Thisprocedurewillproducean
adequatebutlessprecisefitofthedata.Ifsampleshavebeendiluted,the
concentrationreadfromthestandardcurvemustbemultipliedbythe
dilutionfactor.
LIMITATIONSOFTHEPROCEDURE
Thekitshouldnotbeusedbeyondtheexpirationdateonthekitlabel.
Donotmixorsubstitutereagentswiththosefromotherlotsorsources.
Ifsamplesgeneratevalueshigherthanthehigheststandard,dilutethe
samplesandrepeattheassay.
Anyvariationinoperator,pipettingtechnique,washingtechnique,
incubationtimeortemperature,andkitagecancausevariationin
binding.
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Thisassayisdesignedtoeliminateinterferencebysolublereceptors,
bindingproteins,andotherfactorspresentinbiologicalsamples.Until
allfactorshavebeentestedintheQuantikineImmunoassay,the
possibilityofinterferencecannotbeexcluded.
TECHNICALHINTS
Whenmixingorreconstitutingproteinsolutions,alwaysavoidfoaming.
Toavoidcross-contamination,changepipettetipsbetweenadditionsof
eachstandardlevel,betweensampleadditions,andbetweenreagent
additions.Also,useseparatereservoirsforeachreagent.
Whenusinganautomatedplatewasher,addinga30secondsoak
periodfollowingtheadditionofwashbuffer,and/orrotatingtheplate
180degreesbetweenwashstepsmayimproveassayprecision.
Toensureaccurateresults,properadhesionofplatesealersduring
incubationstepsisnecessary.
SubstrateSolutionshouldremaincolorlessuntiladdedtotheplate.
KeepSubstrateSolutionprotectedfromlight.SubstrateSolutionshould
changefromcolorlesstogradationsofblue.
StopSolutionshouldbeaddedtotheplateinthesameorderasthe
SubstrateSolution.Thecolordevelopedinthewellswillturnfromblue
toyellowuponadditionoftheStopSolution.Wellsthataregreenin
colorindicatethattheStopSolutionhasnotmixedthoroughlywiththe
SubstrateSolution.
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人脑源性神经营养因子人脑源性神经营养因子(BDNF)快速检测试剂盒快速检测试剂盒
人脑源性神经营养因子人脑源性神经营养因子快速检测试剂盒快速检测试剂盒
使用说明书使用说明书
使用说明书使用说明书
本试剂盒仅供研究使用本试剂盒仅供研究使用
本试剂盒仅供研究使用本试剂盒仅供研究使用
产品编号产品编号：CSB-E04501h
产品编号产品编号
检测范围检测范围：：0.62ng/ml-20ng/ml
检测范围检测范围：：
最低检测限最低检测限：：0.31ng/ml
最低检测限最低检测限：：
特异性特异性：：本试剂盒可同时检测天然或重组的BDNF，且与其他相关蛋白基
特异性特异性：：
本无交叉反应。
有效期有效期：6个月（2-8℃避光保存）
有效期有效期
预期应用预期应用：：ELISA法定量测定人血清，血浆及其它相关生物液体中BDNF
预期应用预期应用：：
含量。
说明说明
说明说明
1.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
2.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实
验结果造成任何影响。
实验原理实验原理
实验原理实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心法检测BDNF含量。首先用BDNF抗体包被微
孔板，制备成固相载体，然后加入样品（标准品与待测标本）同时加入酶标
记的BDNF抗体，特异性地形成固相抗体-抗原-酶标记抗体复合物，加底物
显色后在酶标仪测定吸光值（OD值），根据标准曲线计算出样品的含量。
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试剂盒组成及试剂配制试剂盒组成及试剂配制
试剂盒组成及试剂配制试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板酶联板(Assayplate)：一块（96孔）。
酶联板酶联板
2.标准品标准品（Standard）：5×0.5ml/瓶。
标准品标准品
Standard1Standard2Standard3Standard4Standard5
0.62ng/ml1.87ng/ml4.37ng/ml10ng/ml20ng/ml
3.酶结合物酶结合物（（HRP-conjugate）：）1×6ml/瓶。
酶结合物酶结合物（（））
4.显色剂显色剂A（（SubstrateA）：）：1×7ml/瓶。
显色剂显色剂（（）：）：
5.显色剂显色剂B（（SubstrateB）：）：1×7ml/瓶。
显色剂显色剂（（）：）：
6.终止液终止液（（StopSolution）：）1×7ml/瓶。
终止液终止液（（））
需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6.蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存标本的采集及保存
标本的采集及保存标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分
钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻
融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C
1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复
冻融。
注：注：以上标本置以上标本置4℃℃保存应小于保存应小于1周，周，-20℃℃或或-80℃℃均应密封保存均应密封保存，，-20℃℃不应超过不应超过1个个
注注：：以上标本置以上标本置℃℃保存应小于保存应小于周周，，℃℃或或℃℃均应密封保存均应密封保存，，℃℃不应超过不应超过个个
月，月，-80℃℃不应超过不应超过2个月个月；标本溶血会影响最后检测结；标本溶血会影响最后检测结果，果，因此溶血标本不宜进行检因此溶血标本不宜进行检
月月，，℃℃不应超过不应超过个月个月；；标本溶血会影响最后检测结标本溶血会影响最后检测结果果，，因此溶血标本不宜进行检因此溶血标本不宜进行检
测。测。
测测。。
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操作步骤操作步骤
操作步骤操作步骤
1.将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时。
2.将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设
两孔，每孔加入相应标准品50ul；其余每个检测孔直接加待测标本50ul。
3.每孔加入酶结合物50ul（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，
置37℃温育1小时。
4.手工洗板，弃去孔内液体。去离子水注满各孔，静置10秒甩干，重复三
次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
5.每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，37℃避光显色
15分钟，每孔加终止液50μl。
6.用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔调零点，然后测定各孔OD
值。
数据处理数据处理
数据处理数据处理
1.手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的0D值为纵
轴，画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清OD值找到对应的浓度
值。
2.计算机：使用线性拟合功能，应将标准品S1-S5的浓度取对数（Log(浓
度)）作为X，将对应的OD值减去空白对照孔OD值后取对数（Log(OD
值-NSB)）作为Y，进行线性拟合。再从拟合线上计算出待测血清浓度。
注意事项注意事项
注意事项注意事项
1.从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及所需预包被板条应置室温
（18-25℃）平衡30分钟后方可使用，余者应及时封好口，放回2-8℃中避
光保存，以备后用。
2.使用前试剂应摇匀。
3.结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
4.不同批号的试剂不可混用。
5.加样时应注意避免所用各试剂及样品之间的交又污染。
6.操作时，试剂盒内每种试剂各使用一个吸头，每一种标准品使用一个吸头，
每一个样品各使用一个吸头，吸头最好一次性使用。
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人脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒
厦门慧嘉生物经营ELISA试剂盒及抗体、细胞因子、生化试剂、耗材等生物试剂产品。诚信经营，价格实惠，服务周到，质量有保证。咨询电话:189060116280592-6020891QQ:1048735792http://www.biohj.com/download.aspx(说明书下载网站)该说明书是PDF格式转化的，固排版有所变化，欢迎老师QQ或电话或邮箱索取原版说明书