双向电泳蛋白点的切取和保存

  仪器信息网 ·  2012-09-20 09:02  ·  43751 次点击
1.用PDQuest软件或肉眼比对,找出感兴趣的蛋白点,并做好标记和记录。
2.用MilliQ水冲洗胶2次。
3.用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗Ep管
4.将枪头(200l)下端剪去,使其内径略小于蛋白斑点的直径,用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗枪头。
5.对准斑点中央小心将蛋白切割下来,放入Ep管,MilliQ水漂洗2次,如胶块太大,将其切成1x1mm的胶片。
6.将切好的点做好标记和记录,置-80oC保存或冻干后-20oC存放。
注意事项:
1.尽量避免皮肤和头发的角蛋白的污染,在操作过程中应戴一次性的PE手套(不用乳胶手套)和帽子。
2.不要将胶长期存放于乙酸溶液中。
3.Ep管及染胶的容器必须用甲醇和水充分清洗,尤其应与进行Westernblotting的容器分开,以避免casein或BSA的污染。

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