1.使用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。但瓶口过松，易污染。
2.保持C02培养箱内空气干净。定期用紫外线灯消毒，或用油精纱布擦拭后，再用无菌干纱布擦干。
3.按内水槽中加1/3—1/2体的灭菌蒸溜水(1000毫升蒸馏水中加新洁尔灭5毫升)，以维持箱内湿度.避免培养液蒸发。
4.取放培养物时，可将培养瓶皿置于带盖搪瓷盘或饭盒内，缩短开箱的时间，减少CO2消耗。搪瓷盘入箱前，盘外壁要先用酒精纱布擦拭，再用无菌干纱布擦干，以减少带入箱内的微生物。
5.使用C02培养箱前要阅读说明书，调节CO2时必须与气瓶减压器连用。气瓶减压器由双表组成，左表是低压表，右表是高压表，高压表连接螺杆。