仪器信息网提示：目的建立肠泰颗粒中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,以KromasilKR100-C18柱(4.6mm250mm,5m)为分离柱,目的建立肠泰颗粒中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,以KromasilKR100-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为分离柱,甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺(85∶15∶0.04∶0.02)为流动相,检测波长为220nm。结果齐墩果酸进样量在在2.04～10.2μg范围内线性关系良好，相关系数为0.9992,平均回收率为98.60%，RSD=1.76%。结论方法可靠、简单可行,为控制肠泰颗粒的质量提供了科学依据。
肠泰颗粒是江苏省中西医结合医院王小宁院长的临床经验方，由白花蛇舌草、薏苡仁等7味中药材组成,用于大肠癌的术后辅助治疗，效果显著。本制剂的有效成分齐墩果酸具有护肝、解肝毒、降糖降脂、抗炎抗病毒、抗癌等作用［1］，齐墩果酸的抗癌作用几乎贯穿了肿瘤发展的各个阶段，包括抑制肿瘤的生成、诱发以及诱导细胞的分化，能有效地抑制肿瘤血管的生成、肿瘤细胞的侵袭和转移［2］，可作为衡量制剂质量的指标之一。用于齐墩果酸的含量测定方法很多，较早应用比色法、中和法,操作复杂,显色误差较大,对酸性杂质无分辨力和选择性,所以近年来已少应用。薄层扫描法应用广泛,高效液相(HPLC)法有操作快速和准确性高的优势,正在取代其它方法。本文采用高效液相色谱法测定方中齐墩果酸的含量,为肠泰颗粒的质量标准研究奠定基础［3］。
1仪器与试药
1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；HH-6数显恒温水浴锅(金坛市丹瑞电器厂)；AB135S十万分之一天平(METTLER公司)；DHG-9240型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)；RE-52AA旋转蒸发器(南京金正数字仪器有限公司)。
1.2试药齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110709-200304)，乙醇(分析纯，南京化学试剂厂)，95%医用乙醇，水为乐百氏纯净水，乙腈、甲醇(色谱纯，美国天地公司)。肠泰颗粒(江苏省中医药研究院中药制剂室自制)。
2方法与结果
2.1色谱条件［4］
色谱柱为KromasilKR100-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)(带保护柱)，流动相为甲醇∶水∶冰乙酸：三乙胺(85∶15∶0.04∶0.02),流速0.5ml·min-1,检测波长220nm,柱温20℃,进样15μl。图谱见图1。
2.2对照品溶液的制备
精密称取齐墩果酸对照品2.04mg,置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含齐墩果酸0.204mg)。
2.3供试品溶液的制备
取肠泰颗粒(批号071224)6g,置于具塞三角瓶中，加甲醇50ml,密闭超声30min,补足重量，滤过，取续滤液25ml,水浴挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至5ml，摇匀，0.45μm滤膜滤过。
2.4阴性对照品溶液的制备
取处方中缺白花蛇舌草等含齐墩果酸的药材,制成阴性对照颗粒,取阴性对照颗粒按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。
2.5线性关系考察
精密吸取对照品溶液10,15,20,25,40，50μl分别进样测定。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线得回归方程Y=363.19X-74.10,r=0.9992,齐墩果酸在2.04～10.2μg范围内线性关系良好。
2.6精密度实验
精密吸取齐墩果酸对照品溶液重复进样5次。峰面积积分值RSD为1.27%，表明仪器精密度良好。
2.7重复性实验
取肠泰颗粒(批号071224)5份,每份6g,按供试品溶液制备方法,制得供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,测得供试品中含齐墩果酸含量RSD=1.31,表明重复性较好。
2.8稳定性实验
取同一供试品溶液，分别在0，3，6，9，12h进样，峰面积积分值RSD为2.37%，表明样品稳定性良好。
2.9回收率测定
取肠泰颗粒(批号071224)6份，每份3g,分别加入精密称取的齐墩果酸1.035mg,按“2.3”项下同法处理。按上述色谱条件进行测定。计算其回收率。结果见表1。表1齐墩果酸回收率实验结果(略)
2.10含量测定
取4批样品,按上述“2.3”方法操作,制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定。结果见表2。表2齐墩果酸含量测定结果(略)
3讨论
流动相曾选择乙腈-磷酸盐缓冲液体系、甲醇-水体系［5］、分离效果均不好，最后选用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺体系，分离效果最好，达到基线分离。
实验过程中，曾比较了索氏提取与超声提取，结果含量基本一致，但索氏提取耗时较长，超声提取时间较短，易操作，所以采用超声提取的方法。