仪器信息网提示：目的建立高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷含量的方法。方法采用HypersilODS2柱(4.6mm250mm5m)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液目的建立高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷含量的方法。方法采用HypersilODS2柱(4.6mm×250mm×5μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)；柱温30℃；检测波长230nm。结果芍药苷线性范围0.12～1.08μg，平均回收率=98.78%，RSD=1.35%。结论该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂中白芍的质量控制。
大黄虫丸芍药苷高效液相色谱法
大黄虫丸收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部［1］，主要由熟大黄、土鳖虫、水蛭、桃仁、白芍、黄芩等12味中药组成，功效活血化淤，通经消癥。用于瘀血内停而致腹部肿块、肌肤甲错、经闭不行等，临床疗效确切。但原药为蜜丸，剂型落后，本实验拟对其进行二次开发，原方中药味较多，《中国药典》含量测定只对方中熟大黄中大黄素进行了含量测定，对用量较大的白芍未进行定量，实验采用高效液相色谱法建立了该药中芍药苷的含量测定方法，为进一步开发该制剂打下基础。
1器材
1.1仪器
AngilentHP1100高效液相色谱仪；G1314A紫外检测器；KQ-500DE型超声仪。
1.2药品大黄虫丸(广东阳江制药厂有限公司，批号051104，051218，060320)；阴性样品(自制)。
1.3试剂及材料
芍药苷对照品批号(中国药品生物制品检定所，批号0715-200211)；高效液相使用乙腈为色谱纯，水为高纯水；其余试剂均为分析纯。
2方法
2.1含量测定色谱条件色谱柱为AngilentHypersilODS2柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85)；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长230nm；进样量10μl。
2.2对照品溶液的制备精密称芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作为对照品贮备液。
2.3标准曲线的绘制分别精密吸取对照品贮备液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。各精密吸取10μl注入液相色谱仪中，测定，测得峰面积，以对照品进样量为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线，线性范围为0.12～1.08μg，回归方程Y=941.6X6.2919，r=0.9999。
2.4供试品溶液的制备取本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz，40℃)处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，通过氧化铝-活性炭柱(中性氧化铝3g，湿法装柱，上覆层析用活性炭1g，甲醇预洗)，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，水浴浓缩至适量，转移至10ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品液。HPLC图谱见图1。
2.5阴性实验按处方比例，制得缺白芍制剂，按供试品项下方法制备阴性样品，进行高效液相测定，证明阴性无干扰。
2.6精密度实验取芍药苷对照品溶液(60.8μg/ml)，重复进样5次，测得峰面积分别为580.27545，580.94385，583.23654，582.19873，583.49573，RSD=0.24%,表明仪器精密度良好。
2.7稳定性实验取供试品溶液(批号051104)，每隔2h进样测定1次，共进样6次，测得芍药苷的峰面积值分别为345.85455，348.25948，351.16549，347.02654，349.98742，346.14215。RSD=0.62%，表明样品溶液在10h内测定稳定。
2.8重复性实验取样品(批号051104)5份，按供试品制备项下分别提取，精制，测定，芍药苷含量分别为1.8026，1.8374，1.8244，1.8149，1.7886(mg/g)，RSD=1.04%，表明实验重复性良好。
2.9加样回收率实验取样品(批号051104)5份，分别加入芍药苷对照品适量，按样品制备项下方法制备。结果见表1。表1芍药苷加样回收率实验结果(略)
2.10样品测定分别取3批样品，按供试品溶液制备项下制备供试品，分别进样，测定即得。测定结果见表2。表2不同批次样品中芍药苷的含量测定结果(略)
《中国药典》2005年版Ⅰ部中白芍药材中芍药苷含量不得少于1.6%，推算得知大黄虫丸中芍药苷含量应不得少于1.44mg/g，因此以上3批样品含量均合格，二次开发制剂中芍药苷的含量应以此为依据。
3讨论
原方中药味较多，直接使用溶剂提取进行液相测定干扰较大，因此实验考察了供试品制备方法中提取溶剂(甲醇，稀乙醇)、提取方法(回流、超声)、提取时间(20，40，60min)、过柱(上样量、洗脱量)的条件，结果以正文所述方法最好，样品能够达到较好的分离。
试比较了3种流动相［2］：①甲醇-水-冰醋酸(49∶50∶1)；②乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)；③乙腈-水(13∶87)，结果以流动相②分离效果最好，故选择流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)。
该含量测定方法简便，快速，重现性好，既可以为进一步开发大黄虫丸奠定基础，亦适合推广应用于含较多药味的中成药中白芍的检测。