抽提植物细胞的DNA(方法和步骤)
仪器信息网 · 2012-10-12 08:45 · 44628 次点击
抽提植物细胞的DNA(方法和步骤)
1.取25g植物幼叶洗淨,置研钵中,加入25ml柠檬酸纳液(配方:每公升dH2O中加8.18gNacitrate高温高压消毒),研磨成泥状.
2.加入150ml均质化液(HomogenizationSolution)(配方:每公升dH2O中加Nalaurylsulfate100.0g,Nacitrate2.94g,NaCl8.18g,高温高压消毒),再继续研磨30min,将此泥状液以双层纱布过滤,并挤出纱布上的液体.
3.将液体适量均分置离心管,分别加入2倍体积的99﹪酒精,离心200xg,5min,(4℃),倒去上清,此沉淀中含细胞核,加入原液体积1.5倍量的NaCl液(配方:每公升dH2O中加NaCl81.8,高温高压消毒),充分溷合,离心10,000xg,25min,20℃,将上清液倒入一清洁无菌小烧杯,保留.
4.再加入15mlNaCl液至离心管中,充分溷合,再离心10,000xg,25min,20℃.
5.将上清液倒入前已有上清液倒入的同一清洁无菌小烧杯中,缓缓加入等体积的99﹪酒精,并以玻棒搅拌,此时DNA会绕再玻棒上,继续搅拌,至DNA不再绕在玻棒上.