紫外可见分光光度计波长准确度和应用范围
仪器信息网 · 2012-12-27 10:15 · 77620 次点击
紫外可见分光光度计波长准确度和应用范围波长重复性是指波长的实际测定值与理论值的差,是分光光度计的重要技术指标,特别是在对多台仪器的测试结果进行比较时波长显得格外重要,如果仪器的波长准确度不好,就无法进行比较或比较不出正确的结果。因为对同一物质,在不同波长测试时,由于不同波长时摩尔吸光系数不同,就会有不同的灵敏度,即使是同一样品,测试的数据也不会相同。目前国内很多厂家,都采用氧化钬玻璃或钬溶液对仪器的多个波长点(有:241nm、279.4nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、536.2)等十一个点进行检测。但是检测某台仪器的波长准确度是有很多种方法的,在此不作详细介绍。引起波长的不准确,主要有:仪器的本身变形,给光栅的传动结构带来了影响,从而影响波长的准确度;光栅传动结构的精度,这对波长准确度具有决定性的作用,国内目前多数采用丝杆、扇形齿轮以及电机直接带动等,这其中丝杆结构基本上能让波长准确度做到±0.5nm,电机直接带动结构一般能够做到±1.5nm,扇形齿轮结构一般能够做到±2nm,所以丝杆结构相对较好,目前也有很少一部分厂商采用扇形齿轮加丝杆来进行传动,当然这种结构的波长准确度会更高一些。当然也有一些其它因素能直接影响到仪器的波长准确度,例如长年不重新鉴定、电机用的不好等等都会影响到波长准确度。(1)定量分析根据琅伯-比尔定律,样品的浓度和吸光度是成正比关系的,浓度越大,吸收值越高,所以分光光度计用的最多的还是定量分析,定量分析的种类有很多,这里介绍常用的几种定量分析方法:A、绝对法:绝对法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用最多的一种方法。这是一种以琅伯-比尔定律A=εbC为基础的分析方法,某一物质在一定波长下ε值是一个常数,石英比色皿的光程是已知的,也是一个常数。因此,可用紫外可见分光光度计在λmax波长处,测定样品溶液的吸光度值A。然后,根据琅伯比尔定律求出C=A/εb,则可求出该样品溶液的含量或浓度。B、标准法:在选定的波长处,在相同的测试条件下,分别测试标准样品溶液C标和被测试样品溶液C样的吸光度A标和A样。然后,按下式求得样品溶液的浓度或含量。C样=A样/A标×C标C、标准曲线法紫外可见分光光度计最常用的定量分析方法是标准曲线法。即先用标准物质配制一定浓度的溶液,再将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下,测试每个标准溶液的吸光度,以吸光度值为纵坐标,标准溶液对应得浓度为横坐标,绘制标准曲线。最后,将样品溶液按标准曲线绘制程序测得吸光度值,在标准曲线上查出样品溶液对应的浓度或含量。(2)定性分析如果未知物的紫外吸收光谱的最大吸收峰波长λmax、最小吸收峰波长λmin、最大摩尔吸光系数εmax,以及吸收峰的数目、位置、拐点与标准光谱数据完全一致,就可以认为是同一种化合物。定性分析的主要目的是知道分析样品中是什么物质。定量分析和定性分析是分光光度计的两大主要功能,特别是定量分析。其它的分析都应该是从这两大种功能中发展出来的。上海领成生物科技有限公司,励志打造全国最大的专业生产经营实验室仪器的厂家。主要生产销售领成tocan牌凝胶成像,雪花制冰机,pcr仪,离心机,显微摄影,紫外分析仪等自主产品,其中凝胶成像,雪花制冰机,pcr仪,离心机,紫外分析仪,在国内已负盛名,如需了解公司产品,欢迎拨打咨询热线021-51863860,价格合理,质量保证
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